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从红藻藻胆体的结构gydF4y2BaGriffithsia帕西菲卡gydF4y2Ba

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地球上的生命依赖光合作用的太阳能转换成化学能。光合生物已经开发出各种聚光系统捕获阳光。最大的聚光复杂是藻胆体(PBS),主聚光天线在蓝藻和红藻。它由藻胆蛋白和链接器蛋白质的组装机制和能量传递路径PBS并不好理解。在这里,我们报告的结构16.8从红藻-megadalton PBS 3.5决议通过单粒子低温电子显微镜。我们模仿862蛋白质亚基,在核心包括4连接基团,16 rod-core连接器和52杆连接器和位于2048生色团。这个结构揭示了特定基团和藻胆蛋白之间的相互作用机制,和链接器骨架的形成。这些结果提供一个坚实的结构基础,对于我们理解复杂的装配在PBS和能量传递的机制。gydF4y2Ba

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图1:整体架构的PBSgydF4y2Bag·帕西菲卡gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
图2:杆链接器在Rb蛋白。gydF4y2Ba
图3:Rod-core链接器蛋白质。gydF4y2Ba
图4:核心结构。gydF4y2Ba
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我们感谢j . Lei l . Cheng和清华大学的人员的国家蛋白质科学中心北京提供设备支持;j .王为模型建立、结构改进和模型验证;j·戴推荐RNA序列;l·李和朱t .转录组注释;p .孟和f·陈基因组DNA测序和数据挖掘;诉Ragunath, o . Kovalevskiy和g Murshudov分子生物学实验室(MRC)的结构优化;n为模型建立高;h·林l . Chang和y刘讨论;H.-W。小王和j·吴评论手稿; and the members of the Tsinghua National Laboratory for Information Science and Technology for providing the “Explorer 100” cluster system as a computational resource. S.-F.S. and J.Zhao were supported by the National Basic Research Program (2016YFA0501101, 2017YFA0504600 and 2015CB150100). S.-F.S. and S.S. were supported by the National Natural Science Foundation of China (31230016, 31370717 and 31670745 and 31400632 and 31670746). J. Zhao also received support from the CAS fund (QYZDY-SSW-SMC004).

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作者gydF4y2Ba

贡献gydF4y2Ba

S.-F.S.发起并监督项目;J。张和J.M.准备样品;J。张EM数据和执行他们收集的分析和模型构建;J.M.进行生物化学和生物物理分析;J。张和D.L.精制的结构;轮和S.-F.S.结构分析;S.Q.促成了样本选择; J.Zhao participated in the analysis of biochemical data; and S.S., J.Zhao and S.-F.S. wrote the manuscript with help from all authors.

相应的作者gydF4y2Ba

对应到gydF4y2Ba山的太阳gydF4y2Ba或gydF4y2BaSen-Fang隋gydF4y2Ba。gydF4y2Ba

道德声明gydF4y2Ba

相互竞争的利益gydF4y2Ba

作者声明没有竞争的经济利益。gydF4y2Ba

额外的信息gydF4y2Ba

审核人信息gydF4y2Ba自然gydF4y2Ba由于h . van Amerongen z刘和c . Mullineaux贡献的同行评审工作。gydF4y2Ba

出版商的注意:施普林格自然保持中立在发表关于司法主权地图和所属机构。gydF4y2Ba

扩展数据数据和表gydF4y2Ba

扩展数据图1 PBS的制备和表征gydF4y2BaGriffithsia帕西菲卡gydF4y2Ba范和低温电子显微镜分析使用Tecnai北极蛤属显微镜和猎鹰II直接电子探测器。gydF4y2Ba

一个gydF4y2Ba使用蔗糖密度梯度离心法、隔离的pbs。带1是pbs的样品用于单粒子分析在这项研究。带2是拆卸pbs就是明证所示的荧光光谱gydF4y2BacgydF4y2Ba。gydF4y2BabgydF4y2Ba吸收谱带的1。高峰在498 nm、620 nm和650 nm的phycourobilins LgydF4y2BaRgydF4y2Baγ蛋白,藻青素allophycocyanins藻青蛋白和藻青素,分别。高峰在540 nm和565 nm的藻红蛋白的藻红素。gydF4y2BacgydF4y2Ba、荧光发射光谱乐队乐队1和2。带1有一个发射峰在674 nm和乐队2有一个发射峰在580 nm,表明乐队1包含完整的pbs和乐队2包含拆卸pbs。gydF4y2BadgydF4y2Ba在PBS、sds - page分析蛋白质的组件从乐队1。这种凝胶与考马斯亮蓝染色。L的乐队gydF4y2Ba厘米gydF4y2Ba,我gydF4y2BaRgydF4y2Ba和LgydF4y2Ba钢筋混凝土gydF4y2Ba蛋白,是被分析女士表示。凝胶源数据,请参阅gydF4y2Ba补充图1gydF4y2Ba。gydF4y2BaegydF4y2Ba、蛋白质成分分析带1的sds - page沾ZnSOgydF4y2Ba4gydF4y2Ba检测bilin-containing Zn-enhanced紫外线的荧光蛋白。L的乐队gydF4y2BaRgydF4y2Baγ4-8和是被分析和女士表示。凝胶源数据,请参阅gydF4y2Ba补充图1gydF4y2Ba。gydF4y2BafgydF4y2Ba,分析纯化pbs女士。两个批次的样品进行分析。类似的结果证实了我们的净化方法的一致性。gydF4y2BaggydF4y2Ba代表motion-corrected pbs的电子显微图。酒吧,规模100海里。gydF4y2BahgydF4y2Ba,典型的好,reference-free 2 d类平均单粒子图像的pbs。规模的酒吧,20海里。gydF4y2Ba我gydF4y2Ba为对照,低温电子显微镜的傅里叶shell (FSC)的相关性曲线PBS地图有或没有C2对称。gydF4y2BajgydF4y2Ba欧拉角分布的粒子造成的最终重建PBS。每个气缸都代表一个视图和气缸的大小正比于这一观点的粒子数。gydF4y2BakgydF4y2Ba,3 d的工作流分类。gydF4y2BalgydF4y2Ba的晶体结构allophycocyanin (PDB 1 b33)可以安装与PBS的密度地图不同的看法。gydF4y2Ba

扩展数据图2低温电子显微镜分析使用Tecnai PBS的克里奥尔语显微镜和Gatan K2峰会直接电子探测器。gydF4y2Ba

一个gydF4y2Ba代表motion-corrected pbs的电子显微图。酒吧,规模100海里。gydF4y2BabgydF4y2Ba傅里叶功率谱的显微照片显示索恩环扩展到3。gydF4y2BacgydF4y2Ba,典型的好,从单粒子PBS reference-free 2 d类平均图像。酒吧,规模100海里。gydF4y2BadgydF4y2Ba为对照,FSC曲线最终低温电子显微镜的地图的分辨率值为0.143和3.5 FSC曲线之间的精确模型和最终映射值为0.5 4.0的一项决议。gydF4y2BaegydF4y2Ba,黄衫军的最后3 d重建当地PBS显示分辨率的不同的观点。gydF4y2BafgydF4y2Ba工作流的2 d和3 d为低温电子显微镜数据分类处理。gydF4y2BaggydF4y2Ba,屏蔽策略来处理PBS的灵活的地区。几个当地面具不同部分的应用,进一步,这面具被应用于一些特定的地区,导致改善分辨率和当地地图品质。gydF4y2Ba

扩展数据图3 PBS的总体结构。gydF4y2Ba

一个gydF4y2Ba,3 d低温电子显微镜密度PBS的地图。gydF4y2BabgydF4y2Ba顶视图的PBS的原子模型。gydF4y2BacgydF4y2Ba,原理图显示棒的组织从三个垂直气缸和核心观点。gydF4y2BadgydF4y2Ba,棒和核心的组织显示在表面表示。gydF4y2BaegydF4y2Ba,组织的关键结构元素的核心)(a - c棒和PBS显示在表面表示。蛋白质组件颜色如图所示。gydF4y2BafgydF4y2Ba,20好看链接器结构蛋白质。原子模型,这些链接器蛋白与分段叠加低温电子显微镜密度(透明灰色)。域的αgydF4y2Ba中国大陆gydF4y2BaPfam00427 (00427), Pfam01383 (01383), CBDγ,FAS1标签。gydF4y2BaggydF4y2Ba示意图,PBS子单元的结构元素。PBS子单元分为四组根据他们的位置和功能:藻胆蛋白(是),链接器的核心,杆连接器和rod-core连接器。不同的结构元素分别是彩色的。gydF4y2Ba

扩展数据图4杆链接器蛋白质的结构和约束力的合作伙伴。gydF4y2Ba

一个gydF4y2Ba、比较Pfam00427域的LgydF4y2BaRgydF4y2Ba1的晶体结构Pfam00427域从链接器L (PDB 3一组)gydF4y2BaRgydF4y2Ba30.gydF4y2Ba从gydF4y2Ba集胞藻属gydF4y2BaPCC 6803 sp。这两个结构几乎是相同的。gydF4y2BabgydF4y2Ba、比较Pfam01383域的LgydF4y2BaRgydF4y2Ba1的晶体结构Pfam01383 PBS的域(PDB 1 b33)gydF4y2BaMastigocladus laminosusgydF4y2Ba。长α-helix和三个β-strands标签。gydF4y2BacgydF4y2Ba,我gydF4y2BaRgydF4y2Ba2位于杆的内部六聚体Rg (Rg1)。它的C端扩展循环和一个小β-sheet由两个反平行的β-strands的C末端接触的外表面五个一Rb1而已。gydF4y2BadgydF4y2Ba,我gydF4y2BaRgydF4y2Ba3位于杆的内部六聚体射频(Rf1)及其C末端以长α-helix结束。的氨基端部分长螺旋插入五个一Rc1和Rf1之间的区域c端长螺旋卷曲螺旋结构形式的一部分(红色椭圆)与其对称LgydF4y2BaRgydF4y2Ba3′位于六聚体Rf1′。这些结构稳定杆对Rf射频′,相互关联,锚棒Rc和Rc′。gydF4y2BaegydF4y2Ba、结构叠加的LgydF4y2BaRgydF4y2Baγ4-8蛋白质,显示了几乎相同的CBDγCBDγ外的结构和不同的构象。gydF4y2BafgydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2BahgydF4y2Ba,我gydF4y2BaRgydF4y2Baγ6-8 CBDγ域位于五个一高清,哈,Hb,分别。L c端循环的gydF4y2BaRgydF4y2Baγ6锚杆外一侧的内层的六聚体的Rc (Rc1) (gydF4y2BafgydF4y2Ba);L的C末端gydF4y2BaRgydF4y2Baγ7包含几个短α-helices和六聚体与表面的相互作用以Rd2和Rg1 (gydF4y2BaggydF4y2Ba);和一个α-helix N末端的LgydF4y2BaRgydF4y2Baγ8插入两个五个一红警2和Ra3中(之间的空间gydF4y2BahgydF4y2Ba)。gydF4y2Ba我gydF4y2BaL, n端结构域的结构叠加gydF4y2BaRgydF4y2Ba9和FAS1域(PDB 2 ltb)。gydF4y2BajgydF4y2Ba,我gydF4y2BaRgydF4y2Ba9位于棒之间Ra, Rb, Rd, Rg和与他们交互。FAS1域由一个红色的虚线圈。gydF4y2Ba

图5扩展数据广泛的杆杆链接器蛋白质之间的相互作用,是Rb。gydF4y2Ba

一个gydF4y2Ba,gydF4y2BabgydF4y2Ba扩展视图之间的交互的CTR LgydF4y2BaRgydF4y2Ba1和三聚物Rb1II对应gydF4y2Ba图2 cgydF4y2Ba。gydF4y2BacgydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2BaegydF4y2Ba扩展视图之间的交互的交织的《和CTE n端地区LgydF4y2BaRgydF4y2Ba1和三聚物Rb2I对应gydF4y2Ba图2 dgydF4y2Ba。gydF4y2BafgydF4y2Ba,gydF4y2BaggydF4y2Ba,扩大了L的Pfam00427域之间的相互作用的观点gydF4y2BaRgydF4y2Ba1和三聚物Rb2I对应gydF4y2Ba图2 fgydF4y2Ba。gydF4y2BahgydF4y2Ba,扩大了L的Pfam00427域之间的相互作用gydF4y2BaRgydF4y2Ba1和三聚物Rb2II对应gydF4y2Ba图2 ggydF4y2Ba。gydF4y2Ba我gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2BakgydF4y2Ba扩展视图之间的交互的CBDγLgydF4y2BaRgydF4y2Baγ4和三聚物Rb3I对应gydF4y2Ba图2我gydF4y2Ba。gydF4y2BalgydF4y2Ba,扩大了视图的CBDγL之间的交互gydF4y2BaRgydF4y2Baγ4和三聚物Rb3II对应gydF4y2Ba图2 jgydF4y2Ba。螺旋X是标签和突出显示。残留参与原子交互网站坚持表示所示。α、β和H表示α-subunit分别β-subunit和螺旋。gydF4y2Ba米gydF4y2Ba,CBDγ接触杆六聚体的内表面在一个对称的时尚。当第一个重复的CBDγLgydF4y2BaRgydF4y2Baγ4(左gydF4y2BaRgydF4y2Baγ4-CBDγ-1Rep)与第二个重复的CBDγLgydF4y2BaRgydF4y2Baγ4(左gydF4y2BaRgydF4y2Baγ4-CBDγ-2Rep),三(Rb3I和Rb3II),他们相互作用也一致。gydF4y2Ba

图6扩展数据序列比对的LgydF4y2BaRgydF4y2Baγ4-8和γ-subunits从不同的红藻物种和比邻杆b。gydF4y2Ba

一个gydF4y2Ba氨基酸序列比对。预测交通肽推断序列比对和CBDγ域基于结构标签。保守的半胱氨酸残基共价连接到生色团是用蓝色突出显示。注意,一个半胱氨酸残基的CBDγLgydF4y2BaRgydF4y2Baγ7被丝氨酸(用黄色突出显示),符合事实,只有四个发色团在LgydF4y2BaRgydF4y2Baγ7与其他CBDγ领域相比,五发色团。P34784、P92928γ-subunitsgydF4y2BaAglaothamnion neglectumgydF4y2Ba;R7Q9W8、R7QDA3γ-subunitsgydF4y2Ba陨石球粒管gydF4y2Ba;Q7XZS8、P83592γ-subunitsgydF4y2Ba最纯粹gydF4y2Ba。gydF4y2BabgydF4y2Ba,一些示威人群在Rb之间的距离。品红色,比邻的LgydF4y2BaRgydF4y2Baγ;橙色,比邻的β-subunits六聚体藻红蛋白;黄色,比邻的α-subunits六聚体藻红蛋白;深绿色叶,比邻的β-subunits藻青蛋白六聚物;青色,比邻的α-subunits藻青蛋白六聚物;粉色,比邻的藻青蛋白核心的六聚体。虚线显示附近的数字之间的距离(A)比邻在链接器是蛋白质和相邻的示威人群。gydF4y2BacgydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2BafgydF4y2Ba,低温电子显微镜密度(网格)的示威人群(棒)藻红蛋白三聚物Rb2II (gydF4y2BacgydF4y2Ba),藻青蛋白三聚物Rb1II (gydF4y2BadgydF4y2Ba),LgydF4y2BaRgydF4y2Baγ4蛋白(gydF4y2BaegydF4y2Ba)和LgydF4y2BaRgydF4y2Baγ5gydF4y2Ba一个gydF4y2Ba蛋白(gydF4y2BafgydF4y2Ba)。gydF4y2Ba

扩展数据图7 L之间的相互作用gydF4y2Ba钢筋混凝土gydF4y2Ba1 - 3和核心。gydF4y2Ba

一个gydF4y2Ba,α的叠加gydF4y2BaAPCgydF4y2Ba子单元和空间位置的交互LgydF4y2Ba钢筋混凝土gydF4y2Ba蛋白质。使用α执行的排列方式gydF4y2BaAPCgydF4y2Ba亚基作为参考。注意联系螺旋线的LgydF4y2Ba钢筋混凝土gydF4y2Ba蛋白(黑色箭头)也很一致。插图显示了螺旋槽形成αB和EgydF4y2BaAPCgydF4y2Ba亚基。gydF4y2BabgydF4y2Ba,gydF4y2BacgydF4y2Ba之间的相互作用,αgydF4y2BaAPCgydF4y2Ba亚基的螺旋线LgydF4y2Ba钢筋混凝土gydF4y2Ba2 (gydF4y2BabgydF4y2Ba)和LgydF4y2Ba钢筋混凝土gydF4y2Ba3 (gydF4y2BacgydF4y2Ba)。所涉及的残留L之间的交互gydF4y2Ba钢筋混凝土gydF4y2Ba蛋白质是彩色的绿色和坚持所示表示。的αgydF4y2BaAPCgydF4y2Ba面所示表示,残留参与互动是红色的。gydF4y2BadgydF4y2Ba,gydF4y2BaegydF4y2Ba序列比对的LgydF4y2Ba钢筋混凝土gydF4y2Ba1 - 3 (gydF4y2BadgydF4y2Ba)和αgydF4y2BaAPCgydF4y2Ba(gydF4y2BaegydF4y2Ba从不同的红藻和蓝藻种类)。残基参与交互由星号表示,黄色突出显示。gydF4y2Ba

图8扩展数据结构和组装的角色gydF4y2Ba钢筋混凝土gydF4y2Ba4、LgydF4y2Ba钢筋混凝土gydF4y2Ba5和LgydF4y2Ba钢筋混凝土gydF4y2Ba6。gydF4y2Ba

一个gydF4y2Ba,L的概述gydF4y2Ba钢筋混凝土gydF4y2Ba4和LgydF4y2Ba钢筋混凝土gydF4y2Ba5包装其靶蛋白成分。S1′和S2′是单一的α-和β-subunits,分别。gydF4y2BabgydF4y2Ba在中间,长α-helix LgydF4y2Ba钢筋混凝土gydF4y2Ba4′跨越核心三聚物B1α-subunit之一。gydF4y2BacgydF4y2Ba在中间,长α-helix LgydF4y2Ba钢筋混凝土gydF4y2Ba5跨越三聚物的一个α-subunit B2。gydF4y2BadgydF4y2Ba的氨基端扩展LgydF4y2Ba钢筋混凝土gydF4y2Ba4′蜿蜒在表面的三聚物Rb1′我和LgydF4y2Ba钢筋混凝土gydF4y2Ba1gydF4y2BabgydF4y2Ba′。gydF4y2BaegydF4y2BaL, c端延长gydF4y2Ba钢筋混凝土gydF4y2Ba5与核心层B2,杆三聚物Rb1′我和LgydF4y2Ba钢筋混凝土gydF4y2Ba1gydF4y2BabgydF4y2Ba′。gydF4y2BafgydF4y2Ba的氨基端扩展LgydF4y2Ba钢筋混凝土gydF4y2Ba5包装表面的三聚Rc1I B1,并联系我gydF4y2Ba钢筋混凝土gydF4y2Ba1gydF4y2BacgydF4y2Ba。gydF4y2BaggydF4y2Ba,结构的LgydF4y2Ba钢筋混凝土gydF4y2Ba6。gydF4y2BahgydF4y2Ba、结构叠加FAS1域的LgydF4y2Ba钢筋混凝土gydF4y2Ba6和已知FAS1域(PDB 2 ltb)。α-helices和β-strands贴上标签。gydF4y2Ba我gydF4y2Ba,我gydF4y2Ba钢筋混凝土gydF4y2Ba6′,像一个楔子,插入三之间的区域Rd1 3′′我和Re1I层核心,并使广泛接触与周围的蛋白质成分,包括3′,LgydF4y2Ba厘米gydF4y2BaL′,gydF4y2BaCgydF4y2BaL′,gydF4y2Ba钢筋混凝土gydF4y2Ba2′,Rd1′我和Re1I扩展循环两岸的FAS1域。gydF4y2Ba

图9扩展数据结构的核心。gydF4y2Ba

一个gydF4y2Ba,在四垂直结构的核心观点显示了组装和安排的核心层次。底部视图(一样的观点gydF4y2Ba图4摄氏度gydF4y2Ba)显示表面静电势分布的核心。表面的αgydF4y2Ba中国大陆gydF4y2Ba分子环绕。在PyMol表面静电势计算。红色,负静电势;蓝色,积极静电势;灰色,非极性。gydF4y2BabgydF4y2Ba的卡通模型的核心hemidiscoidal PBS(改编自ref。gydF4y2Ba1gydF4y2Ba)。注意,基底油缸有四个三。gydF4y2BacgydF4y2Bainter-cylinder交互的核心是对称的:三聚B1, A2和1′相互作用和三聚B2, 2′和A1相互作用。协会是由之间的交互三个α-subunits(红圈)和两双α−β亚基(黑圈)。gydF4y2BadgydF4y2Ba、比较三个区域的LgydF4y2Ba厘米gydF4y2Ba的晶体结构Pfam00427域。L的三个区域的结构gydF4y2Ba厘米gydF4y2Ba(左gydF4y2Ba厘米gydF4y2Ba-Reg1-3)显示为显示他们加上Pfam00427域的晶体结构(PDB 3正烷烃)是一致的。gydF4y2BaegydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2BaggydF4y2Ba特写视图三个PCB口袋β-subunits盒装的虚线gydF4y2Ba图4 dgydF4y2Ba:β1 (gydF4y2Ba一个gydF4y2Ba),β2 (gydF4y2BabgydF4y2Ba)和ApcF (gydF4y2BacgydF4y2Ba)。比邻及其周围残留所示ball-stick表示和坚持表示,分别。低温电子显微镜密度(网)与相应的原子模型叠加(棒)较低的面板所示。gydF4y2BahgydF4y2Ba、结构叠加ApcF和βgydF4y2BaAPCgydF4y2Ba表明ApcF扩展G-H螺旋发卡的尖端。gydF4y2Ba我gydF4y2Ba,gydF4y2BajgydF4y2Ba低温电子显微镜密度(网)比邻的αgydF4y2Ba中国大陆gydF4y2Ba核心层的α3单元A2,和周围的残留物,对应gydF4y2Ba图4 fgydF4y2Ba与各自的原子模型,叠加(棒;彩色的gydF4y2Ba图4gydF4y2Ba)。gydF4y2Ba

扩展数据图10 APC子单元的识别。gydF4y2Ba

低温电子显微镜密度(网格)的代表地区的APC子单元,与各自的原子模型叠加(棒)。注意不同密度的残留物用红色标记。gydF4y2Ba

扩展数据图11个人六聚体和棒之间合理的能量转移;棒Rd和再保险之间的核心;和棒之间。gydF4y2Ba

一个gydF4y2Ba,示威人群之间的距离(A)接口的个人六聚体Ha和杆Rd(左),和Hb和Ra(右)。gydF4y2BabgydF4y2Ba从比邻,似是而非的能量传递路径Rd和再保险′的核心。嵌入面板显示两个相邻比邻之间的距离(A)。gydF4y2BacgydF4y2Ba之间,似是而非的能量传递路径对Rd和Rb比邻。嵌入面板显示两个相邻比邻之间的距离(A)。gydF4y2BadgydF4y2Ba,合理的能量传递从比邻Ra或Rc。嵌入面板显示两个相邻比邻之间的距离(A)。gydF4y2Ba

扩展数据表1低温电子显微镜数据收集、细化和验证数据gydF4y2Ba
扩展数据表2总结模型验证的藻胆体组件gydF4y2Ba

补充信息gydF4y2Ba

报告总结(PDF 68 kb)gydF4y2Ba

补充信息gydF4y2Ba

这个文件包含补充表1(总结藻胆体的模型建立),补充表2 (25 PBS蛋白质序列),和补充图1 (uncropped SDS PAGE凝胶的扩展数据图1 d, e)。(PDF 2285 kb)gydF4y2Ba

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张,J。,妈,J。,我我u, D.et al。gydF4y2Ba从红藻藻胆体的结构gydF4y2BaGriffithsia帕西菲卡gydF4y2Ba。gydF4y2Ba自然gydF4y2Ba551年gydF4y2Ba57 - 63 (2017)。https://doi.org/10.1038/nature24278gydF4y2Ba

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