摘要gydF4y2Ba
细胞竞争涉及一种保守的适应性感知过程，在此过程中，适应性较强的细胞会淘汰邻近的适应性较差但存活的细胞gydF4y2Ba1gydF4y2Ba．细胞竞争被认为是一种监督机制，以确保正常发育和组织稳态，也被认为是种间嵌合的屏障gydF4y2Ba2gydF4y2Ba．然而，由于缺乏体外模型，还没有在早期发育的种间环境中研究细胞竞争。在这里，我们开发了一种种间多能干细胞(PSC)共培养策略，并揭示了一种以前未知的种间细胞竞争模式。PSCs之间的种间竞争发生在启动的多能细胞中，而不是幼稚的多能细胞，以及进化上遥远的物种之间。通过比较转录组分析，我们发现与NF-κB信号通路相关的基因在不太适应的“失败者”人类细胞中上调。核心成分的基因失活(gydF4y2BaP65gydF4y2Ba，也被称为gydF4y2BaRELAgydF4y2Ba)和上游调节器(gydF4y2BaMYD88gydF4y2Ba)，可以克服人鼠PSCs之间的竞争，从而改善人细胞在小鼠早期胚胎中的存活和嵌合。这些关于细胞竞争的见解为研究进化保守机制铺平了道路，这些机制是哺乳动物早期发育过程中竞争性细胞相互作用的基础。抑制种间PSC竞争可能促进动物体内人体组织的生成。gydF4y2Ba
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本研究生成的RNA-seq数据集已存入CNSA (gydF4y2Bahttps://db.cngb.org/cnsa/gydF4y2Ba)，登录代码CNP0000803，以及NCBI基因表达Omnibus (GEO;gydF4y2Bahttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/geogydF4y2Ba)根据注册编号gydF4y2BaGSE142394gydF4y2Ba．gydF4y2Ba源数据gydF4y2Ba提供了这篇论文。gydF4y2Ba
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确认gydF4y2Ba
我们感谢E. Olson和M. Buszczak对手稿的批判性阅读，D. Schmitz对手稿的校对，R. Jaenisch和T. Theunissen分享WIBR3 (5iLAF)幼稚hES细胞;A. Smith用于共享H9 (PXGL)幼稚hES细胞;T. hisida (Salk)提供pCAG-IP-mKO, pCAG-IP-eGFP和pCAG-IP-Bcl2质粒;L.张某，技术支持;提供部分培养试剂的索尔克干细胞核;中国国家基因库和NCBI基因表达综合数据库提供的服务。J.W.是弗吉尼亚Murchison Linthicum医学研究学者，由德克萨斯州癌症预防与研究所(CPRIT RR170076)和哈蒙再生科学与医学中心资助。洛杉矶州立大学的部分资助来自哈蒙再生科学与医学中心的实习生奖学金。h.h.b.由美国国家科学基金会研究生研究奖学金(2019241092)支持。E.H.C.由美国国立卫生研究院资助(R01 AR053173和R01 GM098816)和HHMI教师学者奖支持。由广东省基因组读写重点实验室(no. 1)资助。 2017B030301011).
作者信息gydF4y2Ba
作者及隶属关系gydF4y2Ba
贡献gydF4y2Ba
J.W.构思了这个想法，发起了这个项目，提供了研究支持，设计、分析和解释结果，并撰写了手稿。C.Z.参与了研究设计，完成了大部分的细胞竞争实验，并撰写了手稿。Y.H.协助进行细胞竞争实验，设计及制作人类及大鼠基因敲除装置(gydF4y2BaP65gydF4y2Ba，gydF4y2BaTP53gydF4y2Ba而且gydF4y2BaMYD88gydF4y2Ba)，进行人鼠及大鼠-小鼠嵌合分析，并协助制备图。M.S.和Y.W.进行了囊胚显微注射和胚胎移植。j.l.， H.S.和Y.G.进行RNA-seq分析。L.Y.帮助培养和描述了人类天真和天真样的PSCs。C.P.A.参与了研究设计、western blotting实验、流式细胞术数据收集和分析。C.P.A.和C.Z.设计、组织和准备了来自所有作者的评论。D.O.衍生大鼠EpiSCs。hrb帮助胚胎切片和染色。B.R.和E.H.C.对使用微图案覆盖物的延时成像实验做出了贡献。所有作者都审阅了手稿。gydF4y2Ba
相应的作者gydF4y2Ba
道德声明gydF4y2Ba
相互竞争的利益gydF4y2Ba
c.z.， Y.H.和J.W.是一项专利申请的发明人(通过德克萨斯大学系统董事会申请，申请号62/963,801;申请状态等待)，题为“调制TLR, NF-KB和p53信号通路，以增强进化遥远物种之间的种间嵌合”。其他作者宣称没有利益竞争。gydF4y2Ba
额外的信息gydF4y2Ba
同行评审信息gydF4y2Ba自然gydF4y2Ba感谢Megan Munsie, Pierre Savatier, Miguel Torres和其他匿名审稿人对这项工作的同行评审所做的贡献。gydF4y2Ba
出版商的注意gydF4y2Ba施普林格自然对出版的地图和机构从属关系中的管辖权主张保持中立。gydF4y2Ba
扩展的数据图形和表格gydF4y2Ba
图1人鼠PSC共培养。gydF4y2Ba
一个gydF4y2Ba， F/R1培养条件下H9-hES细胞(传代51)和mEpiSCs细胞(传代30)的代表性亮场图像。比例尺，200 μm。gydF4y2BabgydF4y2BaF/R1培养条件下mEpiSCs(第32传代)、H9-hES细胞(第49传代)、H1-hES细胞(第51传代)和HFF-hiPS细胞(第21传代)的代表性免疫荧光图像，表达多能转录因子SOX2(绿色)和OCT4(红色)。蓝色,DAPI。比例尺，200 μm。gydF4y2BacgydF4y2Ba经F/ r1长期培养的H9-hES细胞(传代49)和HFF-hiPS细胞(传代23)核型正常。gydF4y2BadgydF4y2Ba，分离和共培养3 d后H9-hES细胞和mEpiSCs细胞周期相位分布的流式细胞仪分析。gydF4y2BangydF4y2Ba= 3，生物重复。数据为均数±s.e.m。gydF4y2BaegydF4y2Ba， H9-hES细胞分离共培养3天后，多能性标志物OCT4、SOX2和TRA-1-60仍保持表达。gydF4y2BafgydF4y2Ba在分离和共培养3天后，mEpiSCs仍保持多能性标记CD24、SOX2、SSEA1和OCT4的表达。图片gydF4y2Ba一个gydF4y2Ba而且gydF4y2BabgydF4y2Ba代表了三个独立的实验。gydF4y2Ba
扩展数据图2人鼠启动PSC竞争。gydF4y2Ba
一个gydF4y2Ba，共培养和单独培养的H9-hES细胞(绿色)和mEpiSCs细胞(红色)第3天AC3染色的代表性免疫荧光图像。蓝色,DAPI;紫色,AC3。插图:虚线框区域的高倍放大图像。比例尺，200 μm。gydF4y2BabgydF4y2Ba，表膜联蛋白V百分比的点状图gydF4y2Ba+gydF4y2Ba第3天共培养和单独培养的H9-hES细胞(左)和mEpiSCs细胞(右)。gydF4y2BangydF4y2Ba= 3，生物重复。gydF4y2BacgydF4y2Ba，共培养(蓝色)和单独培养(红色)H1-hES细胞(左)和mEpiSCs细胞(右)的生长曲线。电镀比例4:1(人:小鼠)，gydF4y2BangydF4y2Ba= 3，生物重复。gydF4y2BadgydF4y2Ba第5天共培养和单独培养的H1-hES细胞(绿色)和mEpiSCs细胞(红色)的代表性荧光图像。比例尺，400 μm。gydF4y2BaegydF4y2Ba，共培养(蓝色)和单独培养(红色)的HFF-hiPS细胞和mEpiSCs的生长曲线。电镀比例4:1(人:小鼠)，gydF4y2BangydF4y2Ba= 5，生物重复。gydF4y2BafgydF4y2Ba第5天共培养和单独培养的HFF-hiPS细胞(绿色)和mEpiSCs细胞(红色)的代表性荧光图像。比例尺，400 μm。实验gydF4y2Ba一个gydF4y2Ba，gydF4y2BadgydF4y2Ba而且gydF4y2BafgydF4y2Ba独立重复了三次，得到了相似的结果。gydF4y2BaPgydF4y2Ba由未配对双尾确定的值gydF4y2BatgydF4y2Ba以及(gydF4y2BabgydF4y2Ba，gydF4y2BacgydF4y2Ba，gydF4y2BaegydF4y2Ba)．所有数据均为均数±s.e.m。gydF4y2Ba
图3人鼠原生PSC和分化共培养缺乏细胞竞争。gydF4y2Ba
一个gydF4y2Ba，具有代表性的亮场图像，显示在naive或naive-like (5iLAF, PXGL, NHSM和LCDM)培养条件下培养的人和小鼠PSCs的典型菌落形态。比例尺，200 μm。gydF4y2BabgydF4y2Ba，由J1小鼠ES细胞产生的毛色嵌合体，在5iLAF培养基中培养。gydF4y2BacgydF4y2Ba， RT-qPCR分析WIBR3 (5iLAF)和H9 (PXGL) hES细胞与F/ r1培养的H9-hES细胞中所选幼稚多能标志物的相对表达水平。gydF4y2BangydF4y2Ba= 3，生物重复。gydF4y2BaPgydF4y2Ba由未配对双尾确定的值gydF4y2BatgydF4y2Ba以及。gydF4y2BadgydF4y2Ba，gydF4y2BaegydF4y2Ba在5iLAF (WIRB3)和PXGL (H9)培养基中培养的hES细胞中，SUSD2和KLF17的代表性免疫荧光图像。比例尺，200 μm。gydF4y2BafgydF4y2Ba， 5iLAF培养基中共培养和单独培养的第5天WIBR3 hES细胞(绿色)和J1小鼠ES细胞(红色)的代表性荧光图像。比例尺，400 μm。gydF4y2BaggydF4y2Ba，共培养(蓝色)和单独培养(红色)的H9-hES细胞和J1小鼠ES细胞在PXGL培养基中的生长曲线。gydF4y2BangydF4y2Ba= 3，生物重复。gydF4y2BahgydF4y2Ba，共培养(蓝色)和单独培养(红色)H9-hES细胞和小鼠ES细胞在NHSM培养基中的生长曲线。gydF4y2BangydF4y2Ba= 3，生物重复。gydF4y2Ba我gydF4y2Ba，共培养(蓝色)和单独培养(红色)的人iPS-EPS(扩展多能干细胞)细胞和小鼠EPS细胞在LCDM培养基中的生长曲线。gydF4y2BangydF4y2Ba= 3，生物重复。gydF4y2BajgydF4y2Ba，分化培养条件下共培养和单独培养的H9-hES细胞(绿色)和mEpiSCs细胞(红色)第5天的代表性荧光图像。比例尺，400 μm。gydF4y2BakgydF4y2Ba，gydF4y2BalgydF4y2Ba具有代表性的免疫荧光图像显示，分化培养条件下的H9-hES细胞和mEpiSCs在第5天失去了多能转录因子SOX2(紫色)和OCT4(紫色)的表达。蓝色,DAPI。比例尺，200 μm。图片gydF4y2Ba一个gydF4y2Ba，gydF4y2BadgydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2BafgydF4y2Ba而且gydF4y2BajgydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2BalgydF4y2Ba代表了三个独立的实验。所有数据均为均数±s.e.m。gydF4y2Ba
扩展数据图4人鼠启动的PSC竞争依赖于细胞-细胞接触。gydF4y2Ba
一个gydF4y2Ba，不同比例(小鼠:人= 1:1,1:2,1:4,1:8)分别和共培养H9-hES细胞(左)和mEpiSCs细胞(右)的生长曲线。H9-hES细胞的种子细胞数固定为1 × 10gydF4y2Ba4gydF4y2Ba厘米gydF4y2Ba−2gydF4y2Ba而mEpiSCs的种子细胞数量则根据不同的播种比例进行调整。gydF4y2BangydF4y2Ba= 3，生物重复。gydF4y2BabgydF4y2Ba， H9-hES细胞(左)和mEpiSCs细胞(右)在高、低密度(高，1.25 × 10gydF4y2Ba4gydF4y2Ba厘米gydF4y2Ba−2gydF4y2Ba；低，0.625 × 10gydF4y2Ba4gydF4y2Ba厘米gydF4y2Ba−2gydF4y2Ba；4:1的比例)。gydF4y2BangydF4y2Ba= 3，生物重复。gydF4y2BacgydF4y2Ba， AC3的定量gydF4y2Ba+gydF4y2Ba共培养和单独培养的H9-hES细胞(蓝色)和mEpiSCs细胞(红色)，孵育比例1:1(人:小鼠)，gydF4y2BangydF4y2Ba= 10，随机选取318.2 × 318.2 μmgydF4y2Ba2gydF4y2Ba菲尔兹通过三个独立的实验进行了检查。gydF4y2BadgydF4y2Ba， transwell中共培养和单独培养的H9-hES细胞(绿色)和mEpiSCs细胞(红色)第5天的代表性荧光图像。比例尺，400 μm。图像代表了三个独立的实验。gydF4y2BaegydF4y2Ba，活H9-hES细胞(每厘米细胞数gydF4y2Ba2gydF4y2Ba)在处理后第5天，分别使用不同剂量(50%、33%和10%)的条件培养基(CM)，这些条件培养基采集自H9-hES细胞和mEpiSCs (cCM)共培养或mEpiSCs (mCM)单独培养。gydF4y2BangydF4y2Ba= 3，生物重复。gydF4y2BaPgydF4y2Ba价值观(共同文化与独立文化的比较)，不配对的双尾gydF4y2BatgydF4y2Ba以及(gydF4y2Ba一个gydF4y2Ba，gydF4y2BabgydF4y2Ba)，或Tukey多重比较的单因素方差分析(gydF4y2BacgydF4y2Ba)．所有数据均为均数±s.e.m。gydF4y2Ba
扩展数据图5通过阻断人细胞凋亡克服人-小鼠启动的PSC竞争。gydF4y2Ba
一个gydF4y2BaWestern blot分析证实BCL-2在gydF4y2BaBCL2gydF4y2BaOEgydF4y2Ba臀部的细胞。采用GAPDH作为加载对照。gydF4y2BabgydF4y2Ba，具有代表性的亮场和免疫荧光图像显示长期培养gydF4y2BaBCL2gydF4y2BaOEgydF4y2BahiPS细胞表达核心(SOX2，绿色;OCT4(红色)和引物(CD24，绿色)多能性标记。蓝色,DAPI。比例尺，200 μm。gydF4y2BacgydF4y2Ba，共培养和单独培养第5天的代表性荧光图像gydF4y2BaBCL2gydF4y2BaOEgydF4y2BahiPS细胞(绿色)和mEpiSCs细胞(红色)。比例尺，400 μm。gydF4y2BadgydF4y2Ba，点状图显示证实敲除的RT-qPCR结果gydF4y2BaTP53gydF4y2Ba记录在gydF4y2BaTP53gydF4y2BaKDgydF4y2Ba臀部的细胞。gydF4y2BangydF4y2Ba= 3，生物重复。gydF4y2BaegydF4y2Ba，具有代表性的亮场和免疫荧光图像显示长期培养gydF4y2BaTP53gydF4y2BaKDgydF4y2BahiPS细胞表达核心(SOX2，绿色;OCT4(红色)和引物(CD24，绿色)多能性标记。蓝色,DAPI。比例尺，200 μm。gydF4y2BafgydF4y2Ba，共培养(蓝色)和单独培养(红色)的生长曲线gydF4y2BaTP53gydF4y2BaKDgydF4y2BahiPS细胞和mEpiSCs。gydF4y2BangydF4y2Ba= 3，生物重复。gydF4y2BaggydF4y2Ba，共培养和单独培养第5天的代表性荧光图像gydF4y2BaTP53gydF4y2BaKDgydF4y2BahiPS细胞(绿色)和mEpiSCs细胞(红色)。比例尺，400 μm。gydF4y2BahgydF4y2Ba， Sanger测序结果显示框外65 bp纯合缺失gydF4y2BaTP53gydF4y2BaKOgydF4y2Ba臀部的细胞。粗体，PAM序列。gydF4y2Ba我gydF4y2Ba，具有代表性的亮场和免疫荧光图像显示长期培养gydF4y2BaTP53gydF4y2BaKOgydF4y2BahiPS细胞表达核心(SOX2，绿色;OCT4(红色)和引物(CD24，绿色)多能性标记。蓝色,DAPI。比例尺，200 μm。gydF4y2BajgydF4y2Ba，共培养和单独培养第5天的代表性荧光图像gydF4y2BaTP53gydF4y2BaKOgydF4y2BahiPS细胞(绿色)和mEpiSCs细胞(红色)。比例尺，400 μm。gydF4y2BakgydF4y2Ba， Western blot分析证实TSC1蛋白表达缺失，mTOR通路(S6K磷酸化，pS6K)激活不足gydF4y2BaTSC1gydF4y2BaKOgydF4y2Ba臀部的细胞。采用GAPDH作为加载对照。gydF4y2BalgydF4y2Ba，共培养(蓝色)和单独培养(红色)的生长曲线gydF4y2BaTSC1gydF4y2BaKOgydF4y2BahiPS细胞和mEpiSCs。gydF4y2BangydF4y2Ba= 3，生物重复。gydF4y2Ba米gydF4y2Ba，共培养和单独培养第5天的代表性荧光图像gydF4y2BaTSC1gydF4y2BaKOgydF4y2BahiPS细胞(绿色)和mEpiSCs细胞(红色)。比例尺，400 μm。实验gydF4y2Ba一个gydF4y2Ba而且gydF4y2BakgydF4y2Ba独立重复了三次，得到了相似的结果。凝胶源数据参见补充图。gydF4y2Ba1gydF4y2Ba．图片gydF4y2BabgydF4y2Ba，gydF4y2BacgydF4y2Ba，gydF4y2BaegydF4y2Ba，gydF4y2BaggydF4y2Ba，gydF4y2Ba我gydF4y2Ba，gydF4y2BajgydF4y2Ba而且gydF4y2Ba米gydF4y2Ba代表了三个独立的实验。gydF4y2BaPgydF4y2Ba由未配对双尾确定的值gydF4y2BatgydF4y2Ba以及(gydF4y2BadgydF4y2Ba，gydF4y2BalgydF4y2Ba)．gydF4y2Ba
图6共培养与单独培养H9-hES细胞RNA-seq分析比较gydF4y2Ba
一个gydF4y2Ba，gydF4y2BabgydF4y2Ba， KEGG通路均富集(第1、2、3天合并)(gydF4y2Ba一个gydF4y2Ba)及共用(通常在第1、2及3天共用)(gydF4y2BabgydF4y2Ba) H9-hES细胞中的共urgs。gydF4y2BacgydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2BaegydF4y2Ba，在第1天，与单独培养的H9-hES细胞相比，共培养的火山图显示基因显著上调(红色)和下调(蓝色)(gydF4y2BacgydF4y2Ba)， 2 (gydF4y2BadgydF4y2Ba)及3 (gydF4y2BaegydF4y2Ba)．NF-κB通路相关基因在火山图中表现突出。gydF4y2BaPgydF4y2Ba由修正单侧费雪精确检验(EASE评分)确定的值(gydF4y2Ba一个gydF4y2Ba，gydF4y2BabgydF4y2Ba)或Wald测验(gydF4y2BacgydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2BaegydF4y2Ba)．gydF4y2Ba
图7基因失活gydF4y2BaP65gydF4y2Ba而且gydF4y2BaMYD88gydF4y2Ba在人类PSCs中克服了人鼠启动的PSC竞争。gydF4y2Ba
一个gydF4y2Ba， Sanger测序结果显示两个独立的帧外纯合插入1-bpgydF4y2BaP65gydF4y2BaKOgydF4y2BahiPS细胞克隆:1A3和1B1。粗体，PAM序列。gydF4y2BabgydF4y2BaWestern blot分析证实了P65蛋白在几种独立的缺失表达gydF4y2BaP65gydF4y2BaKOgydF4y2BahiPS细胞克隆。采用GAPDH作为加载对照。gydF4y2BacgydF4y2Ba，gydF4y2BaP65gydF4y2BaKOgydF4y2BahiPS细胞(克隆1A3)经长期传代后核型保持正常(传代10)。gydF4y2BadgydF4y2Ba，具有代表性的亮场和免疫荧光图像显示长期培养的F/ r1gydF4y2BaP65gydF4y2BaKOgydF4y2BahiPS细胞保持稳定的集落形态，表达核心(SOX2，绿色;OCT4(红色)和引物(CD24，绿色)多能性标记。蓝色,DAPI。比例尺，200 μm。gydF4y2BaegydF4y2Ba，代表性苏木精和伊红染色图像产生的畸胎瘤gydF4y2BaP65gydF4y2BaKOgydF4y2BahiPS细胞(克隆1A3)向三个胚层显示谱系分化。比例尺，200 μm。gydF4y2BafgydF4y2Ba，共培养和单独培养第5天的代表性荧光图像gydF4y2BaP65gydF4y2BaKOgydF4y2BahiPS细胞(绿色，克隆1A3)和mEpiSCs细胞(红色)。比例尺，400 μm。gydF4y2BaggydF4y2Ba，共培养(蓝色)和单独培养(红色)的生长曲线gydF4y2BaP65gydF4y2BaKOgydF4y2BahiPS细胞(克隆1B1)和mEpiSCs。gydF4y2BangydF4y2Ba= 3，生物重复。数据为均数±s.e.m。gydF4y2BahgydF4y2Ba，共培养和单独培养第5天的代表性荧光图像gydF4y2BaP65gydF4y2BaKOgydF4y2BahiPS细胞(克隆1B1，绿色)和mEpiSCs(红色)。比例尺，400 μm。gydF4y2Ba我gydF4y2Ba， Sanger测序结果显示框外纯合缺失13-bpgydF4y2BaMYD88gydF4y2BaKOgydF4y2Ba臀部的细胞。粗体，PAM序列。gydF4y2BajgydF4y2Ba， Western blot分析证实MYD88蛋白在小鼠中缺乏表达gydF4y2BaMYD88gydF4y2BaKOgydF4y2Ba臀部的细胞。gydF4y2BakgydF4y2Ba，具有代表性的亮场和免疫荧光图像显示长期培养的F/ r1gydF4y2BaMYD88gydF4y2BaKOgydF4y2BahiPS细胞保持稳定的集落形态，表达核心(SOX2，绿色;OCT4(红色)和引物(CD24，绿色)多能性标记。蓝色,DAPI。比例尺，200 μm。gydF4y2BalgydF4y2Ba，代表性苏木精和伊红染色图像产生的畸胎瘤gydF4y2BaMYD88gydF4y2BaKOgydF4y2BahiPS细胞表现出向三个胚层的谱系分化。比例尺，200 μm。gydF4y2Ba米gydF4y2Ba，共培养和单独培养第5天的代表性荧光图像gydF4y2BaMYD88gydF4y2BaKOgydF4y2BahiPS细胞(绿色)和mEpiSCs细胞(红色)。比例尺，400 μm。gydF4y2BangydF4y2BaWestern blot分析共培养和单独培养野生型和突变型中IKBA、P65、phospho-P65 (s468)、P53蛋白表达水平(gydF4y2BaP65gydF4y2BaKOgydF4y2Ba，gydF4y2BaTP53gydF4y2BaKOgydF4y2Ba而且gydF4y2BaMYD88gydF4y2BaKOgydF4y2Ba) HFF-hiPS细胞。以Vinculin作为加载对照。框内的区域来自不同的墨迹。gydF4y2BaogydF4y2Ba，柱状图显示了蛋白质表达水平的折叠变化(见gydF4y2BangydF4y2Ba)在共同培养和单独培养的野生型和突变型HFF-hiPS细胞中。gydF4y2BangydF4y2Ba= 1，生物复制。实验gydF4y2BabgydF4y2Ba，gydF4y2BajgydF4y2Ba而且gydF4y2BangydF4y2Ba独立重复了三次，得到了相似的结果。凝胶源数据参见补充图。gydF4y2Ba1gydF4y2Ba．图片gydF4y2BadgydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2BafgydF4y2Ba，gydF4y2BahgydF4y2Ba而且gydF4y2BakgydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba米gydF4y2Ba代表了三个独立的实验。gydF4y2Ba
扩展数据图8克服种间PSC竞争增强了早期小鼠胚胎中人类启动的PSCs的生存和嵌合。gydF4y2Ba
一个gydF4y2Ba，野生型胚泡注射后培养1天(d1)、3天(d3)和5天(d5)小鼠胚胎的代表性brightfield和荧光合并图像;gydF4y2BaMYD88gydF4y2BaKOgydF4y2Ba，gydF4y2BaP65gydF4y2BaKOgydF4y2Ba，gydF4y2BaTP53gydF4y2BaKOgydF4y2Ba而且gydF4y2BaBCL2gydF4y2BaOEgydF4y2Ba臀部的细胞。比例尺，100 μm。gydF4y2BabgydF4y2Ba，野生型囊胚注射后第5天小鼠胚胎与OCT4(红色)、eGFP(绿色)和AC3(紫色)共染色的代表性免疫荧光图像;gydF4y2BaMYD88gydF4y2BaKOgydF4y2Ba，gydF4y2BaP65gydF4y2BaKOgydF4y2Ba，gydF4y2BaTP53gydF4y2BaKOgydF4y2Ba而且gydF4y2BaBCL2gydF4y2BaOEgydF4y2Ba臀部的细胞。Top、eGFP、OCT4用DAPI合并图像;底部，eGFP和AC3合并图像与DAPI。比例尺，100 μm和50 μm(插图)。gydF4y2BacgydF4y2Ba，显示eGFP百分比的点图gydF4y2Ba+gydF4y2BaE8-E9小鼠胚胎来源于野生型，gydF4y2BaMYD88gydF4y2BaKOgydF4y2Ba，gydF4y2BaP65gydF4y2BaKOgydF4y2Ba而且gydF4y2BaTP53gydF4y2BaKOgydF4y2Ba臀部的细胞。每个蓝点代表一个胚胎移植实验。gydF4y2BangydF4y2Ba= 2 (wt)，gydF4y2BangydF4y2Ba= 11 (gydF4y2BaMYD88gydF4y2BaKOgydF4y2Ba)，gydF4y2BangydF4y2Ba= 5 (gydF4y2BaP65gydF4y2BaKOgydF4y2Ba),gydF4y2BangydF4y2Ba= 7 (gydF4y2BaTP53gydF4y2BaKOgydF4y2Ba)，独立实验(补充表gydF4y2Ba2gydF4y2Ba)．gydF4y2BadgydF4y2Ba，野生型hiPS细胞囊胚注射获得的E8-E9小鼠胚胎的基因组PCR分析。gydF4y2BaTPA25-AlugydF4y2Ba表示人类特异性引物。gydF4y2BaPTGER2gydF4y2Ba用作加载控制。HFF- hips细胞。NTC，非模板控制。实验独立地重复了三次，得到了相似的结果。凝胶源数据参见补充图。gydF4y2Ba1gydF4y2Ba．gydF4y2BaegydF4y2Ba，gydF4y2BafgydF4y2Ba，显示egfp标记的贡献和分化的代表性免疫荧光图像gydF4y2BaP65gydF4y2BaKOgydF4y2Ba（gydF4y2BaegydF4y2Ba),gydF4y2BaTP53gydF4y2BaKOgydF4y2Ba（gydF4y2BafgydF4y2Ba) E8-E9小鼠胚胎中的hiPS细胞。胚胎切片用抗eGFP抗体和谱系标记进行染色，包括CNN1(中胚层，上)、PAX6(外胚层，中)和SOX17(内胚层，下)。比例尺，100 μm和50 μm(插图)。图片gydF4y2Ba一个gydF4y2Ba，gydF4y2BabgydF4y2Ba，gydF4y2BaegydF4y2Ba而且gydF4y2BafgydF4y2Ba代表了三个独立的实验。gydF4y2Ba
图9不同物种间启动的PSC竞争。gydF4y2Ba
一个gydF4y2Ba，在F/R1培养基中培养的大鼠EpiSCs衍生的代表性亮场图像。左:E7.5 SD大鼠外胚层细胞;中期，第2天大鼠外胚层生长;右，大鼠EpiSCs在第11段(P11)。比例尺，200 μm(左);100 μm(中、右)。gydF4y2BabgydF4y2Ba、大鼠EpiSCs、恒河ES细胞(ORMES23)和牛ES细胞在F/R1培养基、Scale bar、200 μm中培养的典型集落形态的代表性亮场图像。gydF4y2BacgydF4y2Ba代表性免疫荧光图像显示长期F/ r1培养的大鼠EpiSCs, ORMES23恒河ES细胞和牛ES细胞表达多能转录因子SOX2(绿色)和OCT4(红/绿)。蓝色,DAPI。比例尺，200 μm。gydF4y2BadgydF4y2Ba，共培养(蓝色)和单独培养(红色)H1-hES细胞和大鼠EpiSCs的生长曲线。电镀比例4:1(人:大鼠)。gydF4y2BangydF4y2Ba= 3，生物重复。gydF4y2BaegydF4y2Ba共培养(蓝色)和单独培养(红色)ORMES23恒河ES细胞和大鼠EpiSCs的生长曲线。电镀比例4:1(恒河猴:大鼠)。gydF4y2BangydF4y2Ba= 6，生物重复。gydF4y2BafgydF4y2Ba， AC3的定量gydF4y2Ba+gydF4y2Ba第3天共培养和单独培养的ORMES23恒河ES细胞(蓝色)和mEpiSCs细胞(红色)，gydF4y2BangydF4y2Ba= 10，随机选取318.2 × 318.2 μmgydF4y2Ba2gydF4y2Ba菲尔兹通过三个独立的实验进行了检查。gydF4y2BaggydF4y2Ba，共培养(蓝色)和单独培养(红色)的生长曲线gydF4y2BaP65gydF4y2BaKOgydF4y2BahiPS细胞(克隆1B1)和大鼠EpiSCs。gydF4y2BangydF4y2Ba= 3，生物重复。gydF4y2BahgydF4y2Ba，共培养(蓝色)和单独培养(红色)的生长曲线gydF4y2BaMYD88gydF4y2BaKOgydF4y2BahiPS细胞和大鼠EpiSCs。gydF4y2BangydF4y2Ba= 3，生物重复。gydF4y2Ba我gydF4y2Ba，共培养(蓝色)和单独培养(红色)H1-hES细胞和ORMES23恒河ES细胞的生长曲线。电镀比例1:1(恒河猴:人)。gydF4y2BangydF4y2Ba= 3，生物重复。gydF4y2BajgydF4y2Ba，共培养(蓝色)和单独培养(红色)mEpiSCs和大鼠EpiSCs的生长曲线。电镀比例1:1(小鼠:大鼠)。gydF4y2BangydF4y2Ba= 3，生物重复。gydF4y2BakgydF4y2Ba，共培养(蓝色)和单独培养(红色)的牛ES细胞和ORMES23恒河ES细胞的生长曲线。电镀比例1:1(牛:恒河)。gydF4y2BangydF4y2Ba= 3，生物重复。gydF4y2BalgydF4y2Ba，共培养(蓝色)和单独培养(红色)牛ES细胞和大鼠EpiSCs的生长曲线。电镀比例4:1(牛:大鼠)。gydF4y2BangydF4y2Ba= 3，生物重复。图片gydF4y2Ba一个gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2BacgydF4y2Ba代表了三个独立的实验。gydF4y2BaPgydF4y2Ba由未配对双尾确定的值gydF4y2BatgydF4y2Ba以及(gydF4y2BadgydF4y2Ba，gydF4y2BaegydF4y2Ba，gydF4y2BakgydF4y2Ba，gydF4y2BalgydF4y2Ba)或Tukey多重比较的单因素方差分析(gydF4y2BafgydF4y2Ba)．所有数据均为均数±s.e.m。gydF4y2Ba
图10抑制MYD88-P53-P65信号通路对人-人/猴启动的PSC共培养和小鼠胚胎中大鼠细胞嵌合的影响gydF4y2Ba
一个gydF4y2Ba，共培养(蓝色)和单独培养(红色)野生型和gydF4y2BaBCL2gydF4y2BaOEgydF4y2Ba臀部的细胞。gydF4y2BangydF4y2Ba= 3，生物重复。gydF4y2BabgydF4y2Ba，共培养(蓝色)和单独培养(红色)野生型和gydF4y2BaTP53gydF4y2BaKOgydF4y2Ba臀部的细胞。gydF4y2BangydF4y2Ba= 3，生物重复。gydF4y2BacgydF4y2Ba，共培养(蓝色)和单独培养(红色)野生型和gydF4y2BaP65gydF4y2BaKOgydF4y2Ba臀部的细胞。gydF4y2BangydF4y2Ba= 3，生物重复。gydF4y2BadgydF4y2Ba，共培养(蓝色)和单独培养(红色)野生型和gydF4y2BaMYD88gydF4y2BaKOgydF4y2Ba臀部的细胞。gydF4y2BangydF4y2Ba= 3，生物重复。gydF4y2BaegydF4y2Ba，共培养(蓝色)和单独培养(红色)的生长曲线gydF4y2BaBCL2gydF4y2BaOEgydF4y2BahiPS细胞和ORMES23恒河ES细胞。gydF4y2BangydF4y2Ba= 3，生物重复。gydF4y2BafgydF4y2Ba，共培养(蓝色)和单独培养(红色)的生长曲线gydF4y2BaTP53gydF4y2BaKOgydF4y2BahiPS细胞和ORMES23恒河ES细胞。gydF4y2BangydF4y2Ba= 3，生物重复。gydF4y2BaggydF4y2Ba，共培养(蓝色)和单独培养(红色)的生长曲线gydF4y2BaP65gydF4y2BaKOgydF4y2BahiPS细胞和ORMES23恒河ES细胞。gydF4y2BangydF4y2Ba= 3，生物重复。gydF4y2BahgydF4y2Ba，共培养(蓝色)和单独培养(红色)的生长曲线gydF4y2BaMYD88gydF4y2BaKOgydF4y2BahiPS细胞和ORMES23恒河ES细胞。gydF4y2BangydF4y2Ba= 3，生物重复。gydF4y2Ba我gydF4y2Ba中Sanger测序结果显示框外纯合22 bp缺失gydF4y2BaMyd88gydF4y2BaKOgydF4y2Ba大鼠胚胎干细胞。粗体，PAM序列。gydF4y2BajgydF4y2Ba， Sanger测序结果显示框外纯合子1-bp缺失gydF4y2BaTp53gydF4y2BaKOgydF4y2Ba大鼠胚胎干细胞。gydF4y2BakgydF4y2Ba，显示野生型嵌合贡献水平的点图，gydF4y2BaMyd88gydF4y2BaKOgydF4y2Ba而且gydF4y2BaTp53gydF4y2BaKOgydF4y2BaE10.5小鼠胚胎中的大鼠胚胎干细胞。每个蓝点表示一个E10.5胚胎。gydF4y2BangydF4y2Ba= 13 (wt)，gydF4y2BangydF4y2Ba= 14 (gydF4y2BaMyd88gydF4y2BaKOgydF4y2Ba),gydF4y2BangydF4y2Ba= 17 (gydF4y2BaTp53gydF4y2BaKOgydF4y2Ba)、独立胚胎。gydF4y2BaPgydF4y2Ba由单因素方差分析和LSD多重比较确定的值。所有数据均为均数±s.e.m。gydF4y2Ba
补充信息gydF4y2Ba
补充图1gydF4y2Ba
带有大小标记指示的未裁剪扫描。gydF4y2Ba
补充表1gydF4y2Ba
: GO和KEGG富集分析。共培养和单独培养H9-hES细胞差异表达基因的基因本体(GO)和KEGG富集分析P值(EASE评分)，一个改良的单边Fisher精确检验。gydF4y2Ba
补充表2gydF4y2Ba
:人鼠嵌合体实验综述。野生型人鼠嵌合体体外和体内研究综述gydF4y2BaBCL2gydF4y2BaOEgydF4y2Ba，gydF4y2BaTP53gydF4y2BaKOgydF4y2Ba－，gydF4y2BaP65gydF4y2BaKOgydF4y2Ba- - -gydF4y2BaMYD88gydF4y2BaKOgydF4y2Ba臀部的细胞。gydF4y2Ba
补充表3gydF4y2Ba
:引物信息。本研究使用的gRNAs、测序引物、qRT-PCR引物和基因组PCR引物的序列信息。gydF4y2Ba
补充表4gydF4y2Ba
:一抗。本研究中使用的一抗信息。gydF4y2Ba
补充表5gydF4y2Ba
:二抗。本研究中使用的二抗信息。gydF4y2Ba
补充视频1gydF4y2Ba
:引物H9-hES细胞与mEpiSCs共培养。第2天共培养的H9-hES细胞(绿色)和mEpiSCs细胞(红色)的延时成像。gydF4y2Ba
补充视频2gydF4y2Ba
:引物H9-hES细胞分离培养。第2天分离培养的H9-hES细胞(绿色)延时成像。gydF4y2Ba
补充视频3gydF4y2Ba
:启动的mEpiSCs分离培养。第2天分别培养的mEpiSCs(红色)的延时成像。gydF4y2Ba
补充视频4gydF4y2Ba
: Naïve人鼠胚胎干细胞共培养。5iLAF条件下共培养的naïve人类ES细胞(WIBR3，绿色)和小鼠ES细胞(红色)在第2天的延时成像。gydF4y2Ba
补充视频5gydF4y2Ba
: H9-hES细胞与mEpiSCs共分化。第2天H9-hES细胞(绿色)和mEpiSCs细胞(红色)共分化培养的延时成像。gydF4y2Ba
补充视频6gydF4y2Ba
:引物H9-hES细胞与mEpiSCs共培养(微图盖玻片)。在第2天至第3天的微图纹覆盖玻片上，对共培养的H9-hES细胞(绿色)和mEpiSCs细胞(红色)进行延时成像。gydF4y2Ba
补充视频7gydF4y2Ba
:引物H9-hES细胞与mEpiSCs共培养(transwell)。第2天跨孔共培养H9-hES细胞(上孔，绿色)和mEpiSCs细胞(下孔，未显示)的延时成像。gydF4y2Ba
补充视频8gydF4y2Ba
:引物H9-hES细胞与mEpiSCs共培养(同上载玻片)。第2天，共培养的H9-hES细胞(左好，绿色)和mEpiSCs细胞(右好，这里没有显示)在ibidi腔载片中的延时成像。gydF4y2Ba
补充视频9gydF4y2Ba
: "gydF4y2BaTP53gydF4y2BaKOgydF4y2BahiPS细胞与mEpiSCs共培养。共培养的延时成像gydF4y2BaTP53gydF4y2BaKOgydF4y2Ba第2天的hiPS细胞(绿色)和mEpiSCs细胞(红色)。gydF4y2Ba
补充视频10gydF4y2Ba
: "gydF4y2BaP65gydF4y2BaKOgydF4y2BahiPS细胞与mEpiSCs共培养。共培养的延时成像gydF4y2BaP65gydF4y2BaKOgydF4y2Ba第3天的hiPS细胞(1A3，绿色)和mEpiSCs细胞(红色)。gydF4y2Ba
补充视频11gydF4y2Ba
: "gydF4y2BaMYDgydF4y2Ba88gydF4y2BaKOgydF4y2BahiPS细胞与mEpiSCs共培养。共培养的延时成像gydF4y2BaMYD88gydF4y2BaKOgydF4y2Ba第3天的hiPS细胞(绿色)和mEpiSC细胞(红色)。gydF4y2Ba
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郑超，胡勇，樱井，M。gydF4y2Baet al。gydF4y2Ba细胞竞争是种间嵌合的障碍。gydF4y2Ba自然gydF4y2Ba592gydF4y2Ba， 272-276(2021)。https://doi.org/10.1038/s41586-021-03273-0gydF4y2Ba
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这篇文章被引用gydF4y2Ba
细胞在发育、稳态和癌症中的竞争gydF4y2Ba
《自然分子细胞生物学gydF4y2Ba(2023)gydF4y2Ba
不要爱你的邻居:干细胞及其他细胞竞争的机制gydF4y2Ba
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