图11:扩展数据gydF4y2BaOTX2gydF4y2Ba通过中级upregulation击倒促进G3 MB分化gydF4y2BaCBFA2T2gydF4y2Ba和gydF4y2BaCBFA2T3gydF4y2Ba。gydF4y2Ba
来自:gydF4y2Ba失败人的菱形唇分化构成成神经管细胞瘤的形成gydF4y2Ba
一个gydF4y2Ba,gydF4y2BaOTX2gydF4y2BaChIP-seqgydF4y2Ba34gydF4y2Ba山峰是丰富gydF4y2BaCBFA2T2gydF4y2Ba基因位点,但不是gydF4y2BaCBFA2T3gydF4y2Ba。gydF4y2BabgydF4y2Ba,OTX2 OTX2-KD后蛋白表达减少。样本用于散装RNA序列。β-肌动蛋白作为加载控制。gydF4y2BacgydF4y2Ba,OTX2 OTX2-KD后蛋白表达减少。样本用于single-nucleus RNA序列。β-肌动蛋白作为加载控制。gydF4y2BadgydF4y2Ba代表图像的主要tumourspheres OTX2-KD和争夺条件HDMB03和MB3W1文化。酒吧规模:300µm。gydF4y2Bae, fgydF4y2Ba后,无偏集群的单一核OTX2-KD HDMB03和MB3W1 G3 MB细胞线gydF4y2Ba(c)gydF4y2Ba。gydF4y2BaggydF4y2Ba,平均的表达基因签名来自散装RNAseq OTX2-KD HDMB03和MB3W1gydF4y2Ba(b)gydF4y2Ba。细胞比绿色更橙色显示细胞高表达基因的特征不变G3 MB细胞系,反之亦然。橙色的细胞可能OTX2-KD效率低下。gydF4y2BahgydF4y2Ba,由CytoTRACE分化的分数gydF4y2Ba73年gydF4y2Ba。低分化细胞所示红色和更多的分化细胞用蓝色表示。结果支持集群模型,6 HDMB03和集群3 MB3W1代表低效OTX2-KD细胞保留WT肿瘤细胞最相似。gydF4y2Ba我gydF4y2BaRBFOX3 (NeuN)蛋白表达增加在HDMB03和MB3W1 OTX2-KD之后,验证GN OTX2-KD后分化。gydF4y2BajgydF4y2Ba基因的表达显著相关,颗粒神经元分化以及正常的人类RL拟时间发展。(上)密度颗粒神经元细胞沿拟时间的血统(扩展数据图。gydF4y2Ba6 bgydF4y2Ba,gydF4y2Ba左gydF4y2Ba)。(底部)扔进垃圾箱的基因表达标记源自发展中人类小脑snRNA-seq数据集(无花果。gydF4y2Ba4gydF4y2Ba)。颗粒神经元基因的表达逐步观察到当OTX2撞倒在G3 MB(图。gydF4y2Ba5我gydF4y2Ba)gydF4y2Ba引人注目的是镜子,正常的颗粒神经元分化,表明G3、G4 MB来自失败的正常分化而不是替代假说,如反式或de-differentiation。gydF4y2BakgydF4y2Ba,gydF4y2BaCBFA2T2gydF4y2Ba和gydF4y2BaCBFA2T3gydF4y2Ba表达HDMB03(左)和MB3W1(右)。gydF4y2BaCBFA2T2gydF4y2Ba表达强烈调节细胞中CytoTRACE评分低于0.8,和gydF4y2BaCBFA2T3gydF4y2Ba遵循。研究结果显示gydF4y2BaCBFA2T2gydF4y2Ba然后gydF4y2BaCBFA2T3gydF4y2Ba在应对有效OTX2-KD调节早期。gydF4y2BalgydF4y2Ba,gydF4y2BaCBFA2T2gydF4y2Ba表达的变化响应CBFA2T2过度(CBFA2T2-OE) HDMB03 qPCR。gydF4y2Ba米gydF4y2Ba,CBFA2T2 CBFA2T2-OE后蛋白表达增加。β-actin用作加载控制。gydF4y2BangydF4y2Ba代表图像的主要tumourspheres CBFA2T2-OE RFP GFP和控制条件。酒吧规模:600µm。gydF4y2Bao pgydF4y2Ba,活细胞数(gydF4y2BaogydF4y2Ba)和可行性(gydF4y2BapgydF4y2BaCBFA2T2-OE)的反应。活细胞数显著降低CBFA2T2-OE,虽然生存能力不变。数据归一化各自的控制和显示分gydF4y2BangydF4y2Ba= 3技术复制/ N = 8生物复制或N = 5,分别为活细胞数量和生存能力。误差线表明SEM。意义评估使用的小动物——一张长有配对t检验生物复制* *gydF4y2BapgydF4y2Ba= 0.0047。gydF4y2Ba问gydF4y2Ba,gydF4y2BaOTX2gydF4y2Ba通过CBFA复杂抑制抑制RL祖细胞的分化。数据在gydF4y2Bad ngydF4y2Ba代表图像从4和8个独立的实验中,分别得到了类似的结果,数据吗gydF4y2Bab, c,我gydF4y2Ba没有进行复制。凝胶源数据,请参阅补充图。gydF4y2Ba1gydF4y2Ba
