实质边界巨噬细胞调节脑脊液的流动动力学gydF4y2Ba

一个gydF4y2BaCD206+ PBMs(青色)很容易与IBA1+小胶质细胞(黄色)区分，位于静脉凝集素+大血管附近(红色)。比例尺，100 μm。gydF4y2BabgydF4y2Ba在美国，PBMs位于脑血管外，在血管周围空间。gydF4y2BacgydF4y2Ba全脑切片定量显示PBMs通过血管周围空间(PVS)和轻脑膜(LM)的空间分布。比例尺，20 μm。N = 5只小鼠。gydF4y2BadgydF4y2Ba， PBM检测的门控策略。pbm被定义为DAPIgydF4y2Ba^−gydF4y2BaCD45gydF4y2Ba^+gydF4y2BaTCRbgydF4y2Ba^−gydF4y2BaCD19gydF4y2Ba^−gydF4y2BaCD11bgydF4y2Ba^+gydF4y2BaCD64gydF4y2Ba^嗨gydF4y2BaF4/80gydF4y2Ba^嗨gydF4y2BaCD206gydF4y2Ba^+gydF4y2Ba细胞。pbm可以用MHCII和CD38分为亚型。gydF4y2BaegydF4y2Ba小鼠腹腔注射Alexa-647结合卵白蛋白(OVA;45 kDa;1毫克/毫升;5μl)。卵巢注射1 h后，小鼠静脉注射Alexa-594结合凝集素(30 μl)， 5 min后灌流。清除小鼠大脑光板显微镜获得的最大投影图像显示在静脉注射凝集素+血管(青色)附近的大脑OVA(洋红色)分布。比例尺，1mm。gydF4y2BafgydF4y2Ba小鼠腹腔注射Alexa-647结合卵白蛋白(OVA;45 kDa;1毫克/毫升;5μl)。小鼠在注射OVA 1小时后进行灌流。具有代表性的体视显微镜图像显示大脑中动脉(MCA)远端全脑OVA分布，并定量显示血管周围和细胞OVA分布。比例尺，1mm和200 μm(插入)。N = 6只小鼠。gydF4y2BaggydF4y2Ba实验原理:WT小鼠i.c.m.注射FITC葡聚糖(FITCDex;4 kDa;10毫克/毫升;5 μl)， 1 h后取脑。冠状面进行抗cd206(青色)和DAPI染色。比例尺，2mm和50 μm(插图)。gydF4y2BahgydF4y2Ba实验示意图:WT小鼠房腔内注射含FITC-Dex 0.5 μl (10mg/ml;绿)和0.5 μl OVA (1 mg/ml;洋红色)和大脑在一小时后被收获。然后对大脑进行抗cd206染色(青色)。比例尺，2mm和50 μm(插图)。gydF4y2Ba我gydF4y2Ba1小时后，小鼠分别在i.s.注射A488-OVA(绿色)和i.c.m.注射A647-OVA(洋红色)。小鼠在1小时后(i.s.注射2小时后)进行灌流。一些细胞同时取样了i.i.c.m.和i.c.m.的OVAs。比例尺，2毫米和100 μm(插入)。所有数据均以平均值+/−SEM表示。老鼠的插图gydF4y2BaggydF4y2Ba而且gydF4y2BahgydF4y2Ba来自瑟维尔医学艺术gydF4y2BaCc / 3.0gydF4y2Ba．gydF4y2Ba

一个gydF4y2Ba， WT小鼠接受氯膦酸酯负载脂质体(CLO)或PBS负载脂质体(PBS)的i.c.m.注射。使用抗iba1染色(黄色)鉴定小胶质细胞。不在轻脑膜和CD206-中的细胞被用于细胞数量的量化和shull分析。比例尺，100 μm和20 μm。n = 5只/组，双尾未配对Welch 'sgydF4y2BatgydF4y2Ba以及;重复测量2-way方差分析与Geisser-Greenhouse校正。gydF4y2BabgydF4y2Ba， WT小鼠i.c.m.注射dii脂质体(5 mg/ml;5 μl)， 24 h后灌流。dii脂质体覆盖整个大脑的代表性图像。标尺:2mm。gydF4y2BacgydF4y2Ba代表性图像显示，在DAPI共染色的轻脑膜(LM)中，CD206+ PBMs(品红)吸收了dii脂质体(青色)。比例尺:50 μm和10 μm(插入)。gydF4y2BadgydF4y2Ba实验示意图:在i.c.m.注射dii脂质体24小时后，收集轻脑膜，对dii阳性细胞进行排序并进行单细胞RNA测序。gydF4y2BaegydF4y2BatSNE图显示dii阳性细胞:单核细胞、PBMs、粒细胞、迁移树突状细胞(migDCs)、成纤维细胞和NK/T细胞。gydF4y2BafgydF4y2Ba，单细胞RNA测序显示4个PBM簇。gydF4y2BaggydF4y2Ba，点图显示gydF4y2BaMrc1gydF4y2Ba,gydF4y2BaH2-Ab1gydF4y2Ba,gydF4y2BaCd74gydF4y2Ba,gydF4y2BaCd163gydF4y2Ba而且gydF4y2BaLyve1gydF4y2Ba基因在4个PBM亚型中的表达。gydF4y2BahgydF4y2Ba，与MHCII相比，下调和上调基因对应的火山图gydF4y2Ba^嗨gydF4y2Ba与Lyve1gydF4y2Ba^嗨gydF4y2Bapbm。gydF4y2BaFgydF4y2Ba-test，根据每个基因用零膨胀模型计算的权重和Benjamini-Hochberg调整的P值调整自由度。gydF4y2Ba我gydF4y2Ba通路分析显示MHCII的上调和下调通路比较gydF4y2Ba^嗨gydF4y2Ba与Lyve1gydF4y2Ba^嗨gydF4y2Bapbm。代表测试。gydF4y2BajgydF4y2Ba．实验示意图:WT小鼠腹腔注射CLO或PBS脂质体。三天后腹腔注射OVA，一小时后灌流。gydF4y2BakgydF4y2Ba．DAPI共染脑冠状面CD206+ PBMs(青色)代表性图像，并进行相应定量。比例尺，200 μm。N = 5只/组;双尾未配对韦尔奇氏gydF4y2BatgydF4y2Ba以及。gydF4y2BalgydF4y2Ba，注射OVA 1小时后全脑内OVA分布的代表性图像及定量。比例尺，5mm。gydF4y2Ba米gydF4y2Ba，冠状面OVA覆盖代表性图像及定量。比例尺，2毫米。为gydF4y2BalgydF4y2Ba而且gydF4y2Ba米gydF4y2Ban = 5只/组;双尾未配对韦尔奇氏gydF4y2BatgydF4y2Ba以及。gydF4y2BangydF4y2BaCLO治疗后3天硬脑膜非上矢状窦区代表性图像进行抗cd206(青色)和抗cd31(黄色)联合染色并进行相应量化。gydF4y2BaogydF4y2BaCLO治疗3天后硬脑膜上矢状窦区代表性图像进行抗cd206(青色)和抗cd31(黄色)联合染色，并进行相应的量化。为gydF4y2BangydF4y2Ba而且gydF4y2BaogydF4y2Ba:比例尺，200 μm;N = 5只/组;双尾未配对韦尔奇氏gydF4y2BatgydF4y2Ba以及。gydF4y2BapgydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2BaugydF4y2Ba， WT小鼠i.c.m.注射CLO或PBS脂质体。一周后收集组织。gydF4y2BapgydF4y2Ba，硬脑膜Lyve1(洋红色)覆盖范围的代表图像共染色用于DAPI和相应的量化。比例尺，3毫米。gydF4y2Ba问gydF4y2Ba，高倍镜显示横窦水平LYVE1染色，DAPI和相应的量化共染色。比例尺，500 μm。gydF4y2BargydF4y2Ba高倍镜图像显示上矢状窦水平LYVE1染色，DAPI和相应的量化共染色。比例尺，200 μm。gydF4y2Ba年代gydF4y2Ba，高倍镜图像显示CD206染色(青色)共染抗cd31(黄色)和相应的定量。比例尺，500 μm。为gydF4y2BapgydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2Ba年代gydF4y2Ban = 5只/组;双尾未配对韦尔奇氏gydF4y2BatgydF4y2Ba以及。gydF4y2BatgydF4y2Ba，来自侧脉络膜丛整体标本的代表图像进行抗cd206(青色)、抗cd31(红色)和DAPI联合染色，用相应的高倍倍数和定量。比例尺，2mm和200 μm(插图)。n = PBS组5只，CLO组6只;双尾未配对韦尔奇氏gydF4y2BatgydF4y2Ba以及。gydF4y2BaugydF4y2Ba，代表颈深淋巴结抗iba1(青色)和DAPI联合染色的图像及相应的量化。比例尺，200 μm。N = 10只/组;双尾未配对韦尔奇氏gydF4y2BatgydF4y2Ba以及。所有数据均以平均值+/−SEM表示。老鼠的插图gydF4y2BadgydF4y2Ba而且gydF4y2BajgydF4y2Ba来自瑟维尔医学艺术gydF4y2BaCc / 3.0gydF4y2Ba．gydF4y2Ba

一个gydF4y2BaPBM消耗一周后，小鼠接受fitc -葡聚糖(FITCDex;4 kDa;5 μl)， 1小时后取脑，冠状面共染DAPI测定FITCdex(绿色)覆盖度。展示了代表性的图像和相应的量化。比例尺，2 mm, n = 5只/组;双尾未配对韦尔奇氏gydF4y2BatgydF4y2Ba以及。gydF4y2BabgydF4y2BaPBM消耗一周后，小鼠接受i.c.m.注射德州红(3 kDa;5 μl)， 1小时后取脑，冠状面共染测定德州红(Texas Red, Red)覆盖率。展示了代表性的图像和相应的量化。刻度条，2 mm. n = PBS组4只，CLO组5只;双尾未配对韦尔奇氏gydF4y2BatgydF4y2Ba以及。gydF4y2BacgydF4y2BaPBM耗竭一周后，小鼠房腔内注射OVA (45 kDa;1 μl)， 1 h后取脑。展示了代表性的图像和相应的量化。刻度条，2 mm. n = PBS组4只，CLO组5只;双尾未配对韦尔奇氏gydF4y2BatgydF4y2Ba以及。gydF4y2BadgydF4y2Ba在PBM消耗一周后，小鼠接受fitc -右旋糖酐(FITCdex;4 kda;1 μl)， 1 h后取脑。展示了代表性的图像和相应的量化。刻度条，2 mm, n = 4只/组;双尾未配对韦尔奇氏gydF4y2BatgydF4y2Ba以及。gydF4y2BaegydF4y2Ba注射CLO或PBS脂质体一周后麻醉小鼠，i.c.m.插入玻璃毛细血管收集脑脊液进行蛋白质组学分析。gydF4y2BafgydF4y2Ba与pbm耗尽小鼠和对照小鼠相比，CSF中下调和上调蛋白对应的火山图。gydF4y2BaFgydF4y2Ba-test，根据每个基因用零膨胀模型计算的权重和Benjamini-Hochberg调整的P值调整自由度。gydF4y2BaggydF4y2Ba，相应的氧化石墨烯通路分析显示在pbm耗尽小鼠和对照小鼠中下调和上调通路。代表测试。gydF4y2BahgydF4y2Ba， Sunburst图表示PBM耗尽后上调的csf衍生的神经元/突触相关蛋白的位置。gydF4y2Ba我gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2BakgydF4y2Ba，相对光谱计数的量化gydF4y2Ba我gydF4y2Ba， Clusterin (CLU);gydF4y2BajgydF4y2Ba，载脂蛋白E (APOE)和gydF4y2BakgydF4y2Ba淀粉样前体肽(APP)。为gydF4y2BaegydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2BakgydF4y2BaPBS组4只，CLO组5只;双尾未配对韦尔奇氏gydF4y2BatgydF4y2Ba以及。gydF4y2BalgydF4y2Ba在PBM衰竭前和PBM衰竭后一周进行基于t2加权解剖序列的MRI检查。gydF4y2Ba米gydF4y2Ba代表性T2图像显示侧脑室(高信号)在PBM耗竭前后。比例尺，2毫米。gydF4y2BangydF4y2Ba，计量心室容积，单位为mmgydF4y2Ba^3.gydF4y2Ba．N = 5只/组;单因素方差分析与Tukey多重比较检验。gydF4y2BaogydF4y2Ba在PBM耗尽后1 - (7d)和3 (21d)周测量颅内压。n = PBS组5只，CLO组7只;PBS组6只，CLO组7只;双向方差分析与Sidak多重比较检验。gydF4y2BapgydF4y2Ba， T1-FLASH 3D图像矢状视图，显示Dotarem (0.754 kDa;5 μl)在嗅球(OB)、侧脑室(Lat vtl)和大脑中动脉(MCA)等不同脑区室中积累。比例尺，3毫米。gydF4y2Ba问gydF4y2Ba，代表性T1-FLASH 3D图像显示Dotarem在MCA水平随时间的分布。比例尺，3毫米。gydF4y2BargydF4y2Ba，量化的Dotarem信号折叠增加超过一小时。n = PBS组5只，CLO组7只;重复测量2-way方差分析与Geisser-Greenhouse校正。gydF4y2Ba年代gydF4y2BaCLO或PBS脂质体注射1周后，小鼠腹腔注射OVA, 1小时后收获颈深淋巴结(dCLNs)。gydF4y2BatgydF4y2Ba， dCLN切片上OVA覆盖的代表性图像。比例尺，200 μm。gydF4y2BaugydF4y2Ba， dCLN面积的量化。gydF4y2BavgydF4y2Ba， OVA覆盖率的量化。为gydF4y2BaugydF4y2Ba而且gydF4y2BavgydF4y2Ban = 10只/组;双尾未配对韦尔奇氏gydF4y2BatgydF4y2Ba以及。gydF4y2BawgydF4y2BaCLO或PBS脂质体注射一周后，小鼠腹腔注射OVA，平卧位置于体视显微镜下动态成像暴露淋巴结内OVA扩散情况。gydF4y2BaxgydF4y2Ba，代表性图像显示随着时间的推移dcln中OVA的覆盖。比例尺，500 μm。gydF4y2BaygydF4y2Ba， OVA流入(左)和流出(右)随时间的量化。n = PBS组3只，CLO组7只;重复测量2-way方差分析与Geisser-Greenhouse校正。gydF4y2BazgydF4y2Ba， dcln中出现OVA流出的小鼠比例。所有数据均以平均值+/−SEM表示。老鼠的插图gydF4y2BaegydF4y2Ba,gydF4y2Ba年代gydF4y2Ba而且gydF4y2BawgydF4y2Ba来自瑟维尔医学艺术gydF4y2BaCc / 3.0gydF4y2Ba．gydF4y2Ba

一个gydF4y2Ba实验示意图:CLO或PBS脂质体注射一周后，将小鼠置于立体定向架中，剃去头部顶部和右侧，切开皮肤，轻轻去除右侧颞肌。gydF4y2BabgydF4y2Ba用棉签清洁患处后，小鼠在i.c.m.注射OVA，并立即侧卧于体视显微镜下。gydF4y2BacgydF4y2Ba，注射前和注射后20min OVA在大脑中动脉水平(MCA)的分布实例。比例尺，5毫米。gydF4y2BadgydF4y2Ba，插页gydF4y2BacgydF4y2Ba．注射后一小时OVA分布的放大图像。示踪剂位于血管周围，在血管周水平。比例尺，1毫米。gydF4y2BaegydF4y2Ba，高倍率gydF4y2BadgydF4y2Ba表明OVA可以通过血管周围细胞进行采样。比例尺，100 μm。gydF4y2BafgydF4y2Ba实验示意图:小鼠分别用KX或异氟醚麻醉(4%诱导，动态成像时1-2%)，并在i.c.m.注射OVA。小鼠在动态成像过程中保持相同的麻醉状态。gydF4y2BaggydF4y2Ba， OVA随时间分布的代表性图像。比例尺，1毫米。gydF4y2BahgydF4y2Ba， OVA覆盖率随时间变化的量化。N = 5只/组;双向方差分析混合效应分析(仅最后30分钟)。gydF4y2Ba我gydF4y2Ba而且gydF4y2BajgydF4y2Ba小鼠灌流后用体视显微镜进行全脑成像，切片后进行冠状面分析。gydF4y2Ba我gydF4y2Ba代表性图像显示全脑OVA分布和定量，大脑中动脉放大。比例尺，2毫米(左面板)和1毫米(右面板)。gydF4y2BajgydF4y2Ba，冠状面OVA覆盖的代表性图像。比例尺，2毫米。为gydF4y2Ba我gydF4y2Ba而且gydF4y2BajgydF4y2Ba， n = 5只/组;双尾未配对韦尔奇氏gydF4y2BatgydF4y2Ba以及。gydF4y2BakgydF4y2BaPBM耗竭1周，i.c.m.注射OVA 1小时后灌流小鼠，取出脑组织，在DAPI染色的冠状切片上分析OVA分布，并从脑表面定量分析OVA深度分布。比例尺，100 μm和50 μm(插图)。N = 5只/组;双尾未配对韦尔奇氏gydF4y2BatgydF4y2Ba以及。gydF4y2BalgydF4y2Ba，代表图像显示抗水通道蛋白4 (AQP4)染色。比例尺，50 μm。gydF4y2Ba米gydF4y2Ba， AQP4覆盖率的量化。gydF4y2BangydF4y2Ba， AQP4+血管定量。为gydF4y2Ba米gydF4y2Ba而且gydF4y2BangydF4y2Ba， n = 5只/组;双尾未配对韦尔奇氏gydF4y2BatgydF4y2Ba以及。gydF4y2BaogydF4y2Ba，对脑切片进行抗aqp4(黄色)和抗cd31(青色)共染，用垂直于血管的线测量血管周围间隙。比例尺，50 μm和10 μm(插图)。gydF4y2BapgydF4y2Ba， PBS(左)和CLO(右)处理小鼠血管周围空间(PVS)的表现。gydF4y2Ba问gydF4y2Ba，血管周围间隙量化。n = PBS组4只，CLO组5只;双尾未配对韦尔奇氏gydF4y2BatgydF4y2Ba以及。gydF4y2BargydF4y2Ba在PBM耗尽一周后，小鼠接受0.1 μm厚荧光微珠的i.c.m.注射;5 μl)后立即侧卧于体视显微镜下，在MCA水平上动态成像。gydF4y2Ba年代gydF4y2Ba，代表性图像显示珠子分布在近端MCA超过一小时。比例尺，1mm。gydF4y2BatgydF4y2Ba，随着时间的推移，珠子覆盖在MCA水平的量化。n = PBS组4只，CLO组7只;重复测量2-way方差分析与Geisser-Greenhouse校正。gydF4y2BaugydF4y2Ba，代表性图像显示位于MCA血管周围间隙的小珠gydF4y2Ba在活的有机体内gydF4y2Ba(左)和体外灌注PBS和固定4% PFA后的小鼠(右)。比例尺，1mm。gydF4y2BavgydF4y2Ba，从提取的整个大脑的代表图像显示珠子在低(左图)和高放大(右图)和相应的图轮廓。小珠(绿线)位于MCA(红线)外，在血管周水平。比例尺，2毫米。gydF4y2BawgydF4y2Ba，测量血管周围间隙(PVS)gydF4y2Ba在活的有机体内gydF4y2Ba而且gydF4y2Ba体外gydF4y2Ba来自同样的老鼠。N = 4只;双尾配对gydF4y2BatgydF4y2Ba以及。gydF4y2BaxgydF4y2Ba，代表图像显示gydF4y2Ba体外gydF4y2Bapbm消耗小鼠和pbm处理的对照组小鼠在MCA水平上的珠粒再分配，以及相应的珠粒覆盖定量。比例尺，500 μm;n = PBS组4只，CLO组5只;双尾未配对韦尔奇氏gydF4y2BatgydF4y2Ba以及。gydF4y2BaygydF4y2Ba，总血管周间隙(MCA两侧之间的间隙，发现有珠粒积累)和MCA直径(通过静脉注射凝集素确定)的量化。gydF4y2BazgydF4y2Ba，对发现珠子堆积的功能空间进行量化。为gydF4y2BaygydF4y2Ba而且gydF4y2BazgydF4y2BaPBS组10只，CLO组9只;双尾未配对韦尔奇氏gydF4y2BatgydF4y2Ba以及。所有数据均以平均值+/−SEM表示。老鼠的插图gydF4y2Ba一个gydF4y2Ba,gydF4y2BafgydF4y2Ba而且gydF4y2BargydF4y2Ba来自瑟维尔医学艺术gydF4y2BaCc / 3.0gydF4y2Ba．gydF4y2Ba

PBM消耗一周后，小鼠进行了一系列不同的行为测试。gydF4y2Ba一个gydF4y2Ba，提示恐惧条件反射:量化第一天三次电击期间冻结的时间百分比，并在恐惧条件反射后1天和7天暴露于条件反射线索。gydF4y2BabgydF4y2Ba高架加迷宫:在打开的手臂上花费的时间百分比(左)，在打开的手臂上花费的总时间(中)和总移动距离(右)的量化。gydF4y2BacgydF4y2Ba、开场试验:量化1小时内移动的距离、总移动距离、1小时内在盒子中心停留的时间和在盒子中心停留的总时间。gydF4y2BadgydF4y2Ba，强制游泳测试:量化总漂浮时间(左)和漂浮延迟(右)。为gydF4y2Ba一个gydF4y2Ba-gydF4y2BadgydF4y2Ban = 10只/组;双尾未配对韦尔奇氏gydF4y2BatgydF4y2Ba以及。gydF4y2BaegydF4y2Ba三室试验:小鼠首先暴露于老鼠(S1)或物体(O)，然后暴露于先前暴露的老鼠(S1)或新老鼠(S2)。定量的总嗅时间和总时间花在室内的两个试验。n = PBS组17只，CLO组13只;双尾未配对韦尔奇氏gydF4y2BatgydF4y2Ba以及。gydF4y2BafgydF4y2BaPBM衰竭1周后监测呼吸频率、心率、动脉搏动和动脉内径。N = 5只/组;双尾未配对韦尔奇氏gydF4y2BatgydF4y2Ba以及。所有数据均以平均值+/−SEM表示。gydF4y2Ba

一个gydF4y2Ba注射CLO或PBS脂质体一周后灌流小鼠，取脑，切除侧脉络膜丛，对CD45-CD13+和CD45-CD31+细胞进行排序，用于单细胞RNA测序。根据典型标记确定了9种不同的细胞类型。gydF4y2BabgydF4y2Ba，火山图对应上调和下调的基因，比较pbm消耗小鼠和pbm治疗对照组小鼠的成纤维细胞，以及相应的氧化石墨烯通路分析显示-(左)和下调(右)通路。gydF4y2BacgydF4y2Ba，火山图对应的上调和下调基因，比较pbm耗尽小鼠和pbs处理的对照组小鼠的周细胞，以及相应的GO Pathway分析显示-(左)和下调(右)通路。gydF4y2BadgydF4y2Ba，火山图对应的上调和下调基因比较ppbm耗尽小鼠和pbs处理对照组小鼠的毛细血管内皮细胞(cECs)，以及相应的GO通路分析显示-(左)和下调(右)通路。为gydF4y2BabgydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2BadgydF4y2Ba，火山情节:gydF4y2BaFgydF4y2Ba-test根据每个基因的权重计算，采用零膨胀模型和Benjamini-Hochberg调整的P值，调整自由度;go路径分析:过表征检验。gydF4y2BaegydF4y2Ba具有代表性的图像显示，抗cd13(壁细胞，黄色)染色的大脑皮层部分，抗cd206(品红色)，抗层粘连蛋白(青色)和DAPI的共染色，并进行相应的量化。比例尺，100 μm;N = 5只/组;双尾未配对韦尔奇氏gydF4y2BatgydF4y2Ba以及。gydF4y2BafgydF4y2Ba具有代表性的图像显示大脑皮层部分的抗cd31(内皮细胞)染色和相应的量化。比例尺，200 μm;N = 6只/组;双尾未配对韦尔奇氏gydF4y2BatgydF4y2Ba以及。gydF4y2BaggydF4y2Ba具有代表性的图像显示在i.c.m.注射OVA(洋红色)的小鼠皮质大脑切片，染色为抗-αSMA(血管平滑肌细胞，青色)，共染色为抗cd31(黄色)，并进行相应的量化。比例尺，200 μm;N = 6只/组;双尾未配对韦尔奇氏gydF4y2BatgydF4y2Ba以及。gydF4y2BahgydF4y2Ba注射CLO或PBS脂质体1周后，冠状切片进行抗层粘连蛋白(青色)和DAPI(蓝色)染色。比例尺，2毫米。gydF4y2BakgydF4y2Ba高倍镜图像显示层粘连蛋白(青色)与CD31+血管(红色)相结合。比例尺，200 μm。gydF4y2Ba我gydF4y2Ba， PBM消耗一周后分离的脑血管中胶原蛋白iv (160 kDa)和Ponceau S的代表性Western blot图像，并进行相应的量化。N = 5只/组;双尾未配对韦尔奇氏gydF4y2BatgydF4y2Ba以及。gydF4y2BajgydF4y2Ba，代表图像显示胶原- iv(青色)沉积在两个αSMAgydF4y2Ba+gydF4y2Ba(动脉/小动脉;黄色)和αSMA-血管。比例尺，200 μm。gydF4y2BakgydF4y2Ba而且gydF4y2BalgydF4y2Ba，小鼠皮层的代表性图像显示gydF4y2BakgydF4y2Ba: Collagen-IV;而且gydF4y2BalgydF4y2Ba:层粘连蛋白(青色)，抗cd31共染色(红色)，以及各自的量化。比例尺，200 μm;N = 6只/组;双尾未配对韦尔奇氏gydF4y2BatgydF4y2Ba以及。gydF4y2Ba米gydF4y2Ba，高倍镜图像显示与αSMA相关的层粘连蛋白(青色)gydF4y2Ba^+gydF4y2Ba表面和穿透的大血管(洋红色)，以及相应的量化。gydF4y2BangydF4y2Ba高倍镜图像显示胶原- iv(青色)与αSMA相关gydF4y2Ba^+gydF4y2Ba表面和穿透的大血管(洋红色)，以及相应的量化。为gydF4y2Ba米gydF4y2Ba而且gydF4y2BangydF4y2Ba:比例尺，200 μm;N = 5只/组;双尾未配对韦尔奇氏gydF4y2BatgydF4y2Ba以及。gydF4y2BaogydF4y2Ba实验示意图:小鼠在腹腔注射OVA (1mg/ml) 30min前先腹腔注射多巴酚丁胺(40μg/kg)或生理盐水;5μl)。小鼠在1小时后进行灌流。gydF4y2BapgydF4y2Ba全脑OVA分布及定量的代表性图像。gydF4y2Ba问gydF4y2Ba，脑组织冠状面OVA覆盖及定量的代表性图像。为gydF4y2BapgydF4y2Ba而且gydF4y2Ba问gydF4y2Ba，比例尺，2毫米;n = PBS组6只，CLO组4只;多巴酚丁胺组PBS组3只，CLO组5只;具有多次比较的双向方差分析。所有数据均以平均值+/−SEM表示。老鼠的插图gydF4y2Ba一个gydF4y2Ba而且gydF4y2BaogydF4y2Ba来自瑟维尔医学艺术gydF4y2BaCc / 3.0gydF4y2Ba．gydF4y2Ba

一个gydF4y2Ba，全脑单细胞RNA测序。根据典型标记确定了18种细胞类型。gydF4y2BabgydF4y2Ba扫描电子显微镜图像从小鼠皮层显示的PBM和血管平滑肌细胞(VSMC)之间的相互作用。比例尺，2 μm。gydF4y2BacgydF4y2Ba的点图。gydF4y2BaMrc1gydF4y2Ba(CD206),gydF4y2BaH2-Ab1gydF4y2Ba(MHCII),gydF4y2BaCd74gydF4y2Ba,gydF4y2BaCd163gydF4y2Ba而且gydF4y2BaLyve1gydF4y2Ba表达式在每个PBM集群中。gydF4y2BadgydF4y2Ba而且gydF4y2BaegydF4y2Ba火山图和GO通路分析显示PBM簇2与其他PBM簇相比，有上调和下调的通路。火山地块:gydF4y2BaFgydF4y2Ba-test根据每个基因的权重计算，采用零膨胀模型和Benjamini-Hochberg调整的P值，调整自由度;go路径分析:过表征检验。gydF4y2BafgydF4y2BaLYVE1+ PBMs(品红色)和αSMA+ VSMC(黄色)之间相互作用的代表性图像。比例尺，200 μm和50 μm(插入)。gydF4y2BaggydF4y2Ba， LYVE1+细胞与αSMA+血管相关或不相关的定量。N = 5只小鼠。gydF4y2BahgydF4y2Ba小鼠静脉注射凝集素，几分钟后再灌流。提取整个大脑，用4%的PFA固定后，染色抗-αSMA(绿色)和抗lyve1(顶部)或抗mhcii(底部)(青色)。比例尺:1mm和200 μm(插图)。gydF4y2Ba我gydF4y2BaLyve1中PBM损耗的表征gydF4y2Ba^CregydF4y2Ba:: Csf1rgydF4y2Ba^{fl / flgydF4y2Ba}使用CD206染色(DAPI共染色)的小鼠(Cre+)与未表达Cre (Csf1rgydF4y2Ba^{fl / flgydF4y2Ba}；Cre)。比例尺，500 μm;n = 7只Cre-小鼠，3只Cre+小鼠;双尾未配对韦尔奇氏gydF4y2BatgydF4y2Ba以及。gydF4y2BajgydF4y2Ba流式细胞仪显示Csf1r中CD206+细胞gydF4y2Ba^{fl / flgydF4y2Ba}老鼠(左;Cre-)和Lyve1gydF4y2Ba^CregydF4y2Ba:: Csf1rgydF4y2Ba^{fl / flgydF4y2Ba}老鼠(右;Cre+)，以及CD206+ PBM细胞数量的量化(左)和CD45+细胞总数中CD206+ PBM的频率(右)。gydF4y2BakgydF4y2Ba， CD11b+CD45的定量分析gydF4y2Ba^intgydF4y2Ba小胶质细胞数量(左)和CD11b+CD45的频率gydF4y2Ba^intgydF4y2Ba来自CD45+细胞的小胶质细胞(右)。gydF4y2BalgydF4y2Ba流式细胞仪显示Csf1r中的CD38+和/或MHCII+ CD206+ PBMsgydF4y2Ba^flgydF4y2Ba老鼠(左;Cre-)和Lyve1gydF4y2Ba^CregydF4y2Ba:: Csf1rgydF4y2Ba^flgydF4y2Ba老鼠(右;Cre +)。gydF4y2Ba米gydF4y2Ba， MHCII+CD38- PBMs的定量(左)，以及总体CD206+细胞中MHCII+CD38- PBMs的频率(右)。gydF4y2BangydF4y2Ba， MHCII-CD38+ PBMs的定量(左)，以及总体CD206+细胞中MHCII-CD38+ PBMs的频率(右)。为gydF4y2Ba我gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2BangydF4y2Ban = 8只Cre-小鼠，4只Cre+小鼠;双尾未配对韦尔奇氏gydF4y2BatgydF4y2Ba以及。gydF4y2BaogydF4y2Ba(上)Lyve1的冠状脑切片代表性图像gydF4y2Ba^CregydF4y2Ba:: Csf1rgydF4y2Ba^{fl / flgydF4y2Ba}(Cre+)和Csf1rgydF4y2Ba^{fl / flgydF4y2Ba}(Cre-)小鼠抗层粘连蛋白(青色)和DAPI联合染色。(下)高倍镜图像显示层粘连蛋白位于CD31+血管附近(红色)，并进行了相应的量化。比例尺，上2mm，下200 μm。gydF4y2BapgydF4y2Ba，(左)Lyve1冠状脑切片的代表性图像gydF4y2Ba^CregydF4y2Ba:: Csf1rgydF4y2Ba^{fl / flgydF4y2Ba}(Cre+)和Csf1rgydF4y2Ba^{fl / flgydF4y2Ba}(Cre-)小鼠的抗胶原蛋白iv(青色，右侧)和DAPI联合染色。(右)高倍镜图像显示胶原蛋白iv位于CD31+血管附近(红色)，并进行了相应的量化。比例尺，左为2mm，右为200 μm。gydF4y2Ba问gydF4y2Ba3月龄Cre+和Cre-小鼠腹腔注射Dotarem (0.74 kda;5 μl)，立即俯卧位放入MRI装置进行动态成像。gydF4y2BargydF4y2Ba，代表性脑冠状图像显示Dotarem分布超过一小时。比例尺，3mm。gydF4y2Ba年代gydF4y2Ban = 8只Cre-小鼠，5只Cre+小鼠;重复测量2-way方差分析与Geisser-Greenhouse校正。gydF4y2BatgydF4y2Ba,gydF4y2Ba在活的有机体内gydF4y2BaLyve1中MCA水平OVA覆盖的成像gydF4y2Ba^CregydF4y2Ba:: Csf1rgydF4y2Ba^{fl / flgydF4y2Ba}(Cre+)和Csf1rgydF4y2Ba^{fl / flgydF4y2Ba}(Cre-)小鼠，具有相应的代表性图像和定量。比例尺，1mm;n = 7只Cre-小鼠，5只Cre+小鼠;重复测量2-way方差分析与Geisser-Greenhouse校正。gydF4y2BaugydF4y2BaLyve1中全脑OVA分布的代表性图像gydF4y2Ba^CregydF4y2Ba:: Csf1rgydF4y2Ba^{fl / flgydF4y2Ba}(Cre+)和Csf1rgydF4y2Ba^{fl / flgydF4y2Ba}(Cre)老鼠。比例尺，5毫米。gydF4y2BavgydF4y2Ba， Lyve1冠状面OVA覆盖率gydF4y2Ba^CregydF4y2Ba:: Csf1rgydF4y2Ba^{fl / flgydF4y2Ba}(Cre+)和Csf1rgydF4y2Ba^{fl / flgydF4y2Ba}(Cre)老鼠。比例尺，2mm。为gydF4y2BaugydF4y2Ba而且gydF4y2BavgydF4y2Ban = 7只Cre-小鼠，3只Cre+小鼠;双尾未配对韦尔奇氏gydF4y2BatgydF4y2Ba以及。gydF4y2BaxgydF4y2Ba， Lyve1中CD31的定量覆盖gydF4y2Ba^CregydF4y2Ba:: Csf1rgydF4y2Ba^{fl / flgydF4y2Ba}(Cre+)和Csf1rgydF4y2Ba^{fl / flgydF4y2Ba}(Cre-)小鼠脑切片。n = 7只Cre-小鼠，3只Cre+小鼠;双尾未配对韦尔奇氏gydF4y2BatgydF4y2Ba以及。gydF4y2BaygydF4y2Ba， Lyve1中MMP活性的定量分析gydF4y2Ba^CregydF4y2Ba:: Csf1rgydF4y2Ba^{fl / flgydF4y2Ba}(Cre+)和Csf1rgydF4y2Ba^{fl / flgydF4y2Ba}(Cre-)小鼠孵育15 min后荧光光谱测定。n = 8只Cre-小鼠，4只Cre+小鼠;双尾未配对韦尔奇氏gydF4y2BatgydF4y2Ba以及。gydF4y2BazgydF4y2Ba，通过Lyve1量化颅内压gydF4y2Ba^CregydF4y2Ba:: Csf1rgydF4y2Ba^{fl / flgydF4y2Ba}(Cre+)和Csf1rgydF4y2Ba^{fl / flgydF4y2Ba}(Cre)老鼠。n = 6只Cre-小鼠，4只Cre+小鼠;双尾未配对韦尔奇氏gydF4y2BatgydF4y2Ba以及。所有数据均以平均值+/−SEM表示。老鼠的插图(gydF4y2BahgydF4y2Ba,gydF4y2Ba问gydF4y2Ba)及核磁共振扫描仪(gydF4y2Ba问gydF4y2Ba)来自Servier Medical ArtgydF4y2BaCc / 3.0gydF4y2Ba．gydF4y2Ba

一个gydF4y2Ba，实验示意图:幼龄(3月龄)和幼龄(24月龄)小鼠腹腔注射OVA (45kda;1毫克/毫升;5μl)。注射后立即将小鼠侧躺在体视显微镜下进行动态成像。gydF4y2BabgydF4y2Ba， OVA随时间分布的代表性图像。比例尺，1毫米。gydF4y2BacgydF4y2Ba3 m和24 m龄小鼠OVA信号随时间的增加而增加。N = 5只/组;重复测量2-way方差分析与Geisser-Greenhouse校正。gydF4y2BadgydF4y2Ba而且gydF4y2BaegydF4y2Ba3、24 m龄小鼠i.c.m.注射OVA。小鼠在1小时后进行灌流。gydF4y2BadgydF4y2Ba3 m和24 m龄小鼠全脑OVA分布的代表性图像，并进行了定量分析。比例尺，5毫米。gydF4y2BaegydF4y2Ba3 m和24 m龄小鼠冠状切片OVA覆盖情况，并进行相应定量分析。比例尺，2毫米。为gydF4y2BadgydF4y2Ba而且gydF4y2BaegydF4y2Ba: 3 m小鼠5只，24 m小鼠4只;双尾未配对韦尔奇氏gydF4y2BatgydF4y2Ba以及。gydF4y2BafgydF4y2Ba3m和24m龄小鼠i.c.m.注射Texas Red (3 kDa;1毫克/毫升;5 μl)， 1 h后取脑。德克萨斯州红色覆盖的代表性图像(红色)和相应的量化。比例尺，2 mm, n = 5只/组;双尾未配对韦尔奇氏gydF4y2BatgydF4y2Ba以及。gydF4y2BaggydF4y2Ba，免疫染色定量LYVE1+MHCII-与LYVE1-MHCII+ PBMs的饼图表示。N = 5只/组;双尾未配对韦尔奇氏gydF4y2BatgydF4y2Ba以及。gydF4y2BahgydF4y2Ba3 m和24 m龄小鼠的代表性流式细胞仪图显示PBM亚型，其特征是CD38和MHCII的表达。gydF4y2Ba我gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2BakgydF4y2Ba，量化gydF4y2Ba我gydF4y2Ba: CD206+ PBMs;gydF4y2BajgydF4y2Ba: MHCII+CD38- PBMs和gydF4y2BakgydF4y2Ba: MHCII-CD38+ PBMs。为gydF4y2Ba我gydF4y2Ba- - - - - -gydF4y2BakgydF4y2Ba， n = 6只/组;双尾未配对韦尔奇氏gydF4y2BatgydF4y2Ba以及。gydF4y2BalgydF4y2Ba3、24m龄小鼠腹腔注射pHrodo颗粒(1 μm;5 μl)，被吞噬后荧光才显现。比例尺，2毫米。gydF4y2Ba米gydF4y2Ba，代表性共聚焦图像显示pHrodo颗粒被CD206+ PBMs吞噬。比例尺，50 μm。gydF4y2BangydF4y2Ba， phrodo阳性PBMs也可以通过流式细胞术检测。gydF4y2BaogydF4y2Ba3米龄小鼠中pHrodo+MHCII-CD38+与pHrodo+MHCII+CD38- PBMs的定量分析。N = 6只小鼠;配对gydF4y2BatgydF4y2Ba以及。gydF4y2BapgydF4y2Ba3 m和24 m龄小鼠的代表性图像显示在MCA水平上pHrodo颗粒再分区，并进行了相应的量化。比例尺，2毫米。gydF4y2Ba问gydF4y2Ba3 m和24 m龄小鼠体内pHrodo+CD206+ PBMs的定量研究。为gydF4y2BapgydF4y2Ba而且gydF4y2Ba问gydF4y2Ban = 6只/组;双尾未配对韦尔奇氏gydF4y2BatgydF4y2Ba以及。gydF4y2BargydF4y2Ba24 m龄小鼠中pHrodo+MHCII-CD38+与pHrodo+MHCII+CD38- PBMs的定量分析。N = 6只小鼠;配对gydF4y2BatgydF4y2Ba以及。gydF4y2Ba年代gydF4y2Ba3 m和24 m大鼠分别接受0.1 μm厚荧光微珠的I.C.M.注射;5μl)。小鼠在1小时后进行灌流。从提取的整个大脑的代表图像显示珠子在低(左图)和高倍放大(插图，右图)的重新划分。比例尺，2毫米和1毫米(插图)。gydF4y2BatgydF4y2Ba，脑珠覆盖率的量化。gydF4y2BaugydF4y2Ba，总血管周间隙的量化(MCA两侧之间的间隙，发现有珠粒堆积)gydF4y2BavgydF4y2Ba， MCA直径的定量(通过静脉注射凝集素鉴定)。gydF4y2BawgydF4y2Ba，对发现珠子堆积的功能空间进行量化。为gydF4y2BatgydF4y2Ba-gydF4y2BawgydF4y2Ban = 5只/组;双尾未配对韦尔奇氏gydF4y2BatgydF4y2Ba以及。gydF4y2BaxgydF4y2Ba3 m和24 m龄小鼠的冠状面共染抗aqp4(黄色)和抗cd31(青色)，测量血管周围空间大小。50 μm和10 μm刻度条(插图)和3 m(中间)和24 m(右)老年小鼠血管周围空间(PVS)直径的表示。gydF4y2BaygydF4y2Ba，血管周围间隙直径的量化。N = 5只/组;双尾未配对韦尔奇氏gydF4y2BatgydF4y2Ba以及。gydF4y2BazgydF4y2Ba，(左)脑冠状切片染色抗层粘连蛋白(青色)和DAPI(蓝色)。(右)高倍镜图像显示层粘连蛋白(青色)与CD31+血管(红色)相结合。比例尺，200 μm。所有数据均以平均值+/−SEM表示。老鼠的插图gydF4y2Ba一个gydF4y2Ba而且gydF4y2BadgydF4y2Ba来自瑟维尔医学艺术gydF4y2BaCc / 3.0gydF4y2Ba．gydF4y2Ba

一个gydF4y2Ba，小提琴情节表现的表达gydF4y2BaCsf1rgydF4y2Ba主要由PBMs，单核细胞和小胶质细胞，以及表达gydF4y2BaCsf1gydF4y2Ba，主要由内皮细胞、壁细胞和小胶质细胞表达，来自小鼠5xFAD单细胞RNA测序数据集。gydF4y2BabgydF4y2Ba而且gydF4y2BacgydF4y2Ba在i.c.m.注射人工脑脊液(aCSF)或M-CSF (10 μg/ml) 6小时后的老年小鼠脑冠状面;5 μl)染色gydF4y2BabgydF4y2Ba:抗胶原蛋白iv(左图)或gydF4y2BacgydF4y2Ba:抗层粘连蛋白(右侧面板)，DAPI，比较尺，2mm和200 μm共染色。gydF4y2BadgydF4y2Ba实验方法:24 m龄小鼠i.c.m.注射m -CSF(或aCSF作为对照)，24 h后小鼠i.c.m.注射OVA，评估CSF流量。gydF4y2BaegydF4y2Ba， MCA水平OVA覆盖的代表性图像，以及相应的量化。比例尺，500 μm。n = aCSF组7只，M-CSF组8只;双尾未配对韦尔奇氏gydF4y2BatgydF4y2Ba以及。gydF4y2BafgydF4y2Ba实验示意图:24 m龄小鼠i.c.m.注射m - csf(或aCSF作为对照)，24 h后用荧光光谱法测定MMP活性。gydF4y2BaggydF4y2Ba， MMP活性的量化。N = 8只/组;双尾未配对韦尔奇氏gydF4y2BatgydF4y2Ba以及。所有数据均以平均值+/−SEM表示。老鼠的插图gydF4y2BadgydF4y2Ba而且gydF4y2BafgydF4y2Ba来自瑟维尔医学艺术gydF4y2BaCc / 3.0gydF4y2Ba．gydF4y2Ba

一个gydF4y2Ba而且gydF4y2BabgydF4y2BaCLO或PBS脂质体注射1个月后，5xFAD小鼠腹腔注射OVA, 1小时后分析大脑。gydF4y2Ba一个gydF4y2Ba全脑OVA分布的代表性图像和定量。比例尺，2毫米。gydF4y2BabgydF4y2Ba，冠状面OVA覆盖代表性图像及定量。比例尺，2毫米。为gydF4y2Ba一个gydF4y2Ba而且gydF4y2BabgydF4y2BaPBS组小鼠7只，CLO组小鼠8只;双尾未配对韦尔奇氏gydF4y2BatgydF4y2Ba以及。gydF4y2BacgydF4y2Ba，杏仁核、皮质和海马Aβ覆盖的定量分析。n = PBS组小鼠7只，CLO组小鼠8只;双尾未配对韦尔奇氏gydF4y2BatgydF4y2Ba以及。gydF4y2BadgydF4y2Ba根据CD13、CD31和CD45的表达，tSNE图显示5xFAD小鼠单细胞RNA测序数据集上的35个不同簇。gydF4y2BaegydF4y2Ba,gydF4y2BaMrc1gydF4y2Ba在巨噬细胞簇中表达可以识别PBM。gydF4y2BafgydF4y2Ba，热图显示经校正p值后，每簇前10个正差异表达基因。gydF4y2BaggydF4y2Ba通路分析显示，与WT窝鼠相比，5xFAD小鼠的通路上调和下调。代表测试。gydF4y2BahgydF4y2BaRNA磁铁算法确定PBMs优先与血管平滑肌细胞(VSMCs)、周细胞和成纤维细胞样细胞(FLCs)相互作用。gydF4y2Ba我gydF4y2Ba对家族、症状前、散发和非ad患者进行单核RNA测序。gydF4y2BajgydF4y2Ba通路分析显示，与对照组相比，家族性AD患者的通路上调和下调。代表测试。gydF4y2BakgydF4y2Ba的基因表达水平gydF4y2BaIfngr1gydF4y2Ba而且gydF4y2BaIfngr2gydF4y2Ba来自小鼠5xFAD单细胞RNA测序数据集的免疫细胞和基质细胞。gydF4y2BalgydF4y2Ba而且gydF4y2Ba米gydF4y2Ba野生型小鼠在i.c.m.注射人工脑脊液(aCSF)或干扰素γ (IFNγ， 20 ng/ml;1μl)。同样的小鼠接受腹腔注射OVA (1mg/ml;3 h后取脑，1 h后取脑。gydF4y2BalgydF4y2Ba全脑OVA分布的代表性图像和定量。gydF4y2Ba米gydF4y2Ba，冠状面OVA覆盖及定量的代表性图像。为gydF4y2BalgydF4y2Ba而且gydF4y2Ba米gydF4y2Ba， n = 5只/组;双尾未配对韦尔奇氏gydF4y2BatgydF4y2Ba以及。gydF4y2BangydF4y2Ba，提出的模型，概括了研究结果。所有数据均以平均值+/−SEM表示。gydF4y2Ba