摘要
体外三维类器官系统已经彻底改变了在培养皿中器官发育和疾病的建模。荧光显微镜有助于描述类器官的细胞组成，并证明了类器官与其原始组织的表型相似性。在这里，我们提供了一个详细的方案，用于对整个类器官进行高分辨率3D成像，并对其进行荧光报告和免疫标记。这种方法适用于各种不同来源和各种大小和形状的类器官。我们已成功应用于人类气道、结肠、肾脏、肝脏和乳腺肿瘤类器官，以及小鼠乳腺类器官。它包括一种简单的清除方法，利用自制的果糖-甘油清除剂，完全捕获3D类器官，并实现逐个细胞的标记定量。样品制备已经通过共聚焦、超分辨率共聚焦、多光子和光片显微镜进行了3D成像优化。从类器官采集到图像分析，该方案需要3天。
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参考文献
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确认
我们非常感谢公主Máxima儿科肿瘤中心的技术支持，以及Hubrecht研究所和蔡司在成像方面的支持和合作。所有成像均在Princess Máxima成像中心进行。这项工作由公主Máxima儿科肿瘤中心资助。J.F.D.得到了玛丽·居里全球奖学金和荷兰科学研究组织(NWO)的VENI资助。J.E.V.得到了澳大利亚国家卫生和医学研究委员会(NHMRC)的支持。
作者信息
作者及隶属关系
贡献
J.F.D.设计了这项研究，进行了实验并解释了数据;j.f.d.、m.a.、L.M.W、H.C.R.A.和P.R.J.进行了实验并分析了数据;j.f.d.， p.r.j.， a.m.v.， g.d.a.， H.H.和J.M.B.进行类器官培养。kc.o.和H.J.G.S.提供荧光结构;A.C.R.帮助设计研究并进行数据解释;j。f。d。和a。c。r。共同撰写了手稿。j.e.v.、H.C.和E.J.W.协助数据解读、稿件撰写和修改。
相应的作者
道德声明
相互竞争的利益
H.C.是与类器官技术相关的几项专利的发明者。j。f。d。是一项类器官技术专利的发明人。
额外的信息
同行评议信息:自然的协议感谢Xavier Gidrol, Melissa Skala和其他匿名审稿人对这项工作的同行评审所做的贡献。
出版商的注意:施普林格自然对出版的地图和机构从属关系中的管辖权主张保持中立。
相关链接
使用此协议的关键引用
Hu, H.等。细胞175, 1591 - 1606。e19 (2018):https://doi.org/10.1016/j.cell.2018.11.013
萨克斯等人。EMBO J．38， e100300 (2019):https://doi.org/10.15252/embj.2018100300
权利和权限
关于本文
引用本文
戴克斯，j.f.，阿里耶娃，M.，韦伦斯，L.M.et al。固定和清除类器官的高分辨率3D成像。Nat Protoc141756-1771(2019)。https://doi.org/10.1038/s41596-019-0160-8
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DOI：https://doi.org/10.1038/s41596-019-0160-8
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