摘要
在早期哺乳动物胚胎发育过程中，滋养层细胞在母胎界面建立细胞-细胞相互作用以确保成功怀孕方面发挥着重要作用。在最近的一项研究中，我们使用Yamanaka因子OCT4, KLF4, SOX2和c-MYC (OKSM)以及选择TS细胞培养条件，通过转录因子介导的核重编程，将人成纤维细胞重新编程为诱导滋养细胞干(iTS)细胞。从人类囊胚或妊娠早期胎盘中提取TS细胞可能因难以获得足够的材料以及伦理问题而受到限制。相比之下，所描述的方法允许从具有不同遗传背景的个体的成年细胞中生成iTS细胞，这对世界各地的许多实验室都很容易获得。在这里，我们描述了使用非整合重编程方法直接从皮肤成纤维细胞生成和建立人类iTS细胞的逐步协议。该方案包括四个主要部分:(1)冷冻保存的人真皮成纤维细胞的恢复，(2)体细胞重编程，(3)重编程中间体的传代，(4)iTS细胞培养的衍生，然后是iTS细胞的常规维护。这些iTS细胞系可在2-3周内建立，并长期培养超过50传代。我们还讨论了几种表征方法，可以执行，以验证iTS细胞衍生使用这种方法。我们的方案允许研究人员生成患者特异性iTS细胞，以研究滋养层和胎盘生物学，以及它们与胚胎细胞在健康和疾病中的相互作用。
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数据可用性
本方案中讨论的主要数据是作为支持主要研究论文中发表的研究的一部分生成的15．
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确认
作者感谢莫纳什Flowcore设施的工作人员提供高质量的细胞分拣服务和技术投入。作者承认使用莫纳什大学的莫纳什显微成像和莫纳什组织学平台的服务和设施。我们也感谢J. Hatwell-Humble和S. Nilsson对鼠标工作的帮助。原理图是用BioRender.com创建的。这项工作得到了国家卫生和医学研究委员会(NHMRC)项目拨款APP1104560和APP2004774的支持。Silvia and Charles Viertel高级医学研究奖学金;以及ARC未来奖学金FT180100674。J.P.T.获得了莫纳什国际学费奖学金和研究培训项目奖学金的支持。X.L.获得了莫纳什国际研究生研究奖学金、莫纳什研究生奖学金和卡梅拉和卡梅罗·里多尔弗干细胞研究奖的支持。澳大利亚再生医学研究所由维多利亚州政府和澳大利亚政府拨款支持。
作者信息
作者及隶属关系
贡献
j。p。t。l。起草了协议。j。p。t。x。l。和j。m。p。写了协议。本协议中提出的大多数实验是由J.P.T.在X.L.和J.M.P.的监督下进行的
相应的作者
道德声明
相互竞争的利益
虽然与本文没有直接关系，但J.M.P.是细胞治疗公司Mogrify Ltd.的联合创始人和股东。X.L.和J.M.P.是一项PCT专利申请(申请号2019904283)的共同发明人，该专利申请由莫纳什大学、新加坡国立大学和Université de Nantes提交，涉及iTS细胞的衍生工作。其他作者宣称没有利益竞争。
同行评审
同行评审信息
自然的协议感谢Robert Morey, Kaela Varberg和其他匿名审稿人对这项工作的同行评审所做的贡献。
额外的信息
出版商的注意施普林格自然对出版的地图和机构从属关系中的管辖权主张保持中立。
相关链接
使用此协议的密钥引用
刘，X等。自然586， 101-107 (2020):https://doi.org/10.1038/s41586-020-2734-6
补充信息
补充信息
活细胞的流式细胞术门控策略
源数据
图4 .来源数据
图4b中各基因的相对表达值。
权利和权限
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关于本文
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谭建平，刘晓霞，马建明。人滋养细胞干细胞的构建。Nat Protoc(2022)。https://doi.org/10.1038/s41596-022-00742-2
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